全文分为二章: 第一章制备带瓣牛颈静脉脱细胞基质的研究 目的：探讨比较理想的制备带瓣牛颈静脉血管脱细胞基质的方法。 方法：将60个新鲜的带瓣牛颈静脉血管片分成新鲜对照组和不同脱细胞方法处理组等共10组(n=6)。观察不同脱细胞方法处理后的牛颈静脉血管片的大体形态、脱细胞的完整程度、胶原弹力纤维保存的完整性、热皱缩温度的变化和最大抗张强度下降的程度。 结果：所有脱细胞处理后的各组牛颈静脉血管片中除了Ⅲ组的瓣膜结构有破坏外，其他组的血管壁和瓣膜结构完好，和新鲜组相似；各组的热皱缩温度和新鲜对照组比较无显著性差异。过高浓度的胰蛋白酶(0.125％)或过长的胰蛋白酶消化时间(24h)可破坏瓣膜结构和牛颈静脉血管中胶原弹力纤维，使得最大抗张强度比新鲜对照组下降20％以上；单纯的曲那通X-100(0.25％)加低浓度的胰蛋白酶(0.025％)脱细胞处理的牛颈静脉血管片残留部分细胞结构；温和的多步骤去垢剂-酶消化法(0.25％或0.5％曲那通X-100，0.025％或0.05％胰蛋白酶和0.02％EDTA，20u/mlDNase-Ⅰ和0.2mg/mlRNase-A)脱细胞处理后的带瓣牛颈静脉血管片比较理想：血管壁和瓣膜大体形态和处理前相似，光镜和电镜观察显示细胞成分去除完全，胶原弹力纤维保存完整，最大抗张强度比新鲜对照组下降约10％～14％。 结论：多步骤去垢剂-酶消化法(0.25％或0.5％曲那通X-10048h,0.025％或0.05％胰蛋白酶和0.02％EDTA30min，20u/mlDNase-Ⅰ和0.2mg/mlRNase-A24h)脱细胞处理后的带瓣牛颈静脉脱细胞基质是比较理想的组织工程血管支架。 第二章人骨髓细胞和脱细胞牛颈静脉体外构建组织工程血管片的研究 目的：研究从人骨髓细胞中分离出骨髓间充质干细胞和内皮祖细胞，将它们在体外培养分化为平滑肌样细胞和内皮细胞，并种植到牛颈静脉脱细胞基质材料上培养，体外构建组织工程血管片。 方法：1.使用Ficoll淋巴细胞分离液，通过密度梯度离心法从人骨髓细胞中分离出单个核细胞，使用贴壁培养法获得骨髓间充质干细胞，CD44抗原染色鉴定；体外培养自然分化为平滑肌样细胞，通过a～平滑肌肌动蛋白染色鉴定。 2.骨髓单个核细胞通过反复贴壁培养法获得内皮祖细胞，CD34抗原染色鉴定；用含多种细胞生长因子和脐静脉内皮细胞株条件培养液的内皮细胞培养基培养，促进内皮祖细胞分化为成熟的内皮细胞，CD31和人类Ⅷ因子相关抗原染色鉴定。 3.将预处理好的牛颈静脉脱细胞基质材料分为A、B、C共3组，分别将平滑肌样细胞和内皮细胞单独或依次种植到牛颈静脉脱细胞基质材料上，体外静态培养14天后，扫描和透射电镜检测血管片上细胞的生长情况、血管腔面的细胞覆盖率以及血管壁中层是否有细胞长入。 结果：原代培养的骨髓间充质干细胞呈螺旋状、放射状生长排列，其细胞CD44抗原表达的阳性率约80％，第4代细胞中a～平滑肌动蛋白抗原表达的阳性率约95％。原代培养的骨髓内皮祖细胞很快形成克隆，第2代细胞中CD34相关抗原的表达阳性率约25％，从第4代细胞起表现出内皮细胞样形态，呈“铺路石”状，并表现接触抑制的特点，第5代细胞CD34相关抗原表达阴性，CD31和第Ⅷ因子相关抗原表达的阳性率为50％左右；在整个培养过程中有成纤维细胞样杂细胞存在。扫描电镜检测到各组血管片上均有较致密的细胞覆盖生长，但细胞排列无序，A、B、C三组血管片的细胞覆盖率分别为70％，78％和83％，透射电镜示血管壁中层无(A、B组)或仅有少量细胞长入(C组)。 结论：1.骨髓来源的间充质干细胞和内皮祖细胞在体外可以培养分化为平滑肌样细胞和内皮细胞。 2.种植于脱细胞牛颈静脉血管片上的骨髓细胞来源的平滑肌样细胞和内皮细胞在静态培养环境中能长期存活。