【摘 要】
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研究目的:1、研究Smad3基因剔除对小鼠造血功能的影响.2、Smad3基因剔除对小鼠树突状细胞功能的影响.研究方法:1、实验小鼠分为5组,每组有Smad3基因剔除小鼠(Smad3)和其同窝
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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研究目的:1、研究Smad3基因剔除对小鼠造血功能的影响.2、Smad3基因剔除对小鼠树突状细胞功能的影响.研究方法:1、实验小鼠分为5组,每组有Smad3基因剔除小鼠(Smad3<-/->)和其同窝孪生的野生型小鼠(Smad3<+/+>)各一只.小鼠的造血功能用14天形成的脾结节(CFU-S<,14>)、多系祖细胞(CFU-GEMM)、粒-单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(BFU-E)测定及外周血象、骨髓象等实验血液学指标来确定.(1)体外实验:每组小鼠取尾血作白细胞、红细胞和血小板计数,涂片作有核细胞分类计数.将一侧股骨的骨髓冲出,制成单细胞悬液,计数其中有核细胞数,测定CFU-GM、BFU-E、CFU-GEMM值.(2)体内实验:将每只小鼠的4×10<4>个骨髓有核细胞,经尾静脉注入3只8-10周经致死量射线照射的同系雌性小鼠体内,测定14天的CFU-S.取一部分胸骨、肝脏、脾脏固定做病理切片, 其余胸骨冲出骨髓,涂片作分类计数.2、实验小鼠分组同上,共用三组小鼠.(1)DC的诱导:将小鼠骨髓单个核细胞在1×10<6>/ml浓度下,以10ng/ml GM-CSF和10ng/ml IL-4条件下诱导7-8天,再以1μg/ml LPS刺激成熟,收集悬浮和轻微贴壁的细胞,即为DC.(2)DC的鉴定及功能:对收集的DC进行形态鉴定,用MTT法检测其刺激异基因初始T细胞增殖的能力(异基因初始T细胞从8-10周龄Balb/c纯系小鼠脾脏细胞经尼龙毛柱分离纯化而来),即混合淋巴细胞反应(MLR).结论:1、Smad3基因剔除使小鼠造血干祖细胞数目减少,而且干祖细胞分化异常,向粒系分化增多.Smad3基因对造血系统的作用与TGF-β的作用可能有一定的相关性.3、Smad3基因剔除影响小鼠树突状细胞的功能,降低树突状细胞刺激异基因T淋巴细胞反应的能力.
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