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研究背景胰腺癌早期的确诊率低,目前常见的检查手段均存在不足,且需较长时间才能获得诊断。胰腺癌的有效治疗手段是手术切除,手术切缘无肿瘤残余是决定预后的重要因素,术中常需要多次切除送冰冻病理才能明确手术切缘阴性。因此胰腺癌的术前诊断和术中即时诊断是目前临床上急需解决的问题。胰头癌容易压迫胆总管引起梗阻性黄疸,胰头癌单发肝转移可考虑联合肝切除。此外肝脏、胆道肿瘤也常常合并梗阻性黄疸。外科手术是梗阻性黄疸重要治疗手段之一,解除胆道梗阻的同时常需要行肝部分切除,在肝切除术经常需要做肝门阻断以减少出血,阻断开放后会导致肝缺血再灌注损伤(HIRI)。目前临床上常见的检查手段均存在不足,手术中对梗阻性黄疸肝缺血再灌注损伤程度的判断亦是目前在临床上急需解决的问题。多光子显微成像技术(MPM)能够反映组织学特征,还能够反映细胞代谢水平。目前为止,MPM在胰腺肿物及梗阻性黄疸HIRI的诊断尚未见报道。基于目前临床上急需解决的上述问题,本课题研究多光子显微成像技术诊断胰腺肿物及梗阻性黄疸HIRI的可行性。第一部分:多光子显微成像技术对胰腺肿物的光学诊断目的:多光子显微成像技术诊断胰腺肿物的可行性。方法:使用MPM研究胰腺石蜡片和新鲜组织,将检查结果与H&E染色的结果对比。结果:在胰腺石蜡片和新鲜组织中,MPM图像均能够和H&E染色一样反应肿瘤的特征,多光子图片与H&E图片均具备可比性。结论:MPM成像技术可以区分胰腺肿物和正常胰腺组织,鉴别胰腺良恶性肿瘤。第二部分多光子显微成像技术在梗阻性黄疸HIRI中的应用一梗阻性黄疸实验动物模型的建立目的:建立梗阻性黄疸实验动物模型。方法:将20只雄性SD大鼠随机分成假手术组(SO组,N=10)和梗阻性黄疽组(OJ组,N=10)2组,OJ组开腹后游离胆管并结扎。SO组开腹后游离胆管,但不结扎胆管。检测两组的肝功能、肾功能。结果:SO组术后肝功能各项指标无明显变化。OJ组术后肝肾功能指标水平逐渐升高,且明显高于相应的SO组(P<0.05)。结论:成功建立梗阻性黄疸的动物模型。二梗阻性黄疸HIRI的机制研究目的:探讨TNF‐a、IL‐1β和NF‐κB在梗阻性黄疸HIRI中的作用。方法:将80只雄性SD大鼠随机分成假手术组(SO组)和肝缺血再灌注损伤组(HIRI组)2组,各组再按照肝缺血后再灌注的时间分为4个亚组:0h组、3h组、6h组和12h组,每组10只。梗阻性黄疸实验动物模型构建1周后,建立肝缺血再灌注损伤模型,检测SO组和HIRI组肝肾功能指标及TNF‐a、IL‐1β及NF‐κB并比较。结果:SO组术后肝功能各项指标无明显变化。HIRI组肝肾功能指标、TNF‐a和IL‐1β含量增加高于相应的SO组,差异有显著统计学意义。0h组、3h组、6h组和12h组的肝组织NF‐κB、TNF‐α及IL‐1β的表达强度,HIRI组均比对应的SO组高(P<0.01)。结论:梗阻性黄疸HIRI中TNF‐a、IL‐1β表达增高,TNF‐a、IL‐1β的表达是梗阻性黄疸大鼠HIRI重要因素之一,NF‐κB通过调控TNF‐a、IL‐1β表达造成肝组织的损伤。三MPM对梗阻性黄疸HIRI的光学诊断目的:多光子显微成像技术诊断梗阻性黄疸HIRI的可行性。方法:SO组和HIRI组中各亚组的新鲜肝组织,每组有10例。新鲜标本的冰冻切片行MPM检测及H&E染色后光镜检测。结果:SO组各亚组肝组织MPM图像特征基本相似,均清晰地显示肝细胞肿胀变性,宽窄不一的肝血窦,散在浸润的炎症细胞。HIRI组MPM图像特征表现如下:0h肝组织显示肝细胞明显肿胀变性,肝血窦宽窄不一,浸润的炎症细胞,明显胶原纤维增生。3h肝组织显示大片状坏死的肝细胞、浸润的炎症细胞和肿胀变性的肝细胞。6h肝组织显示浸润的炎症细胞、肿胀变性的肝细胞、片状坏死的肝细胞、增生的胶原纤维。12h肝组织显示浸润的炎症细胞、肿胀变性的肝细胞、片状坏死的肝细胞、增生的胶原纤维。各组多光子图片与H-E图片均具备可比性。MPM显示SO组细胞的NADH/FAD突光强度明显高于同期HIRI组。各组(0h、3h、6h、12h)SO组细胞NADH/FAD氧化还原率高于同期HIRI组正常细胞,差别有显著意义。结论:MPM成像技术可以反映梗阻性黄疸HIRI的损伤程度。