本研究对屠宰场废弃的猪卵巢内卵母细胞体外成熟培养后，用不同浓度的细胞松弛素B（CB）处理，经盲吸法去核，观察去核效率；用不同的激活剂对卵母细胞预激活处理，通过脱羧秋水仙碱(DC)和放线菌酮(CHX)对卵母细胞的诱导作用，比较不同激活剂对化学诱导去核的影响；同时，对不同成熟时间培养的猪卵母细胞用盲吸法和化学诱导法去核，比较去核方法和不同成熟培养时间对去核效率的影响；分别以盲吸法和化学去核法的卵母细胞为受体细胞，猪耳成纤维细胞为供核体细胞，进行猪体细胞核移植，对重构胚的体外发育进行了观察。旨在确定细胞松弛素B在盲吸法去核中的最佳浓度；筛选化学诱导去核法的最佳预激活剂以及两种去核方法的最佳去核时间和探索崭新的化学试剂诱导去核卵母细胞为核受体的体细胞核移植方法。为猪体细胞克隆技术研究中卵母细胞去核这一关键环节提供理论依据。通过研究，结果如下： 1. 不同浓度的细胞松弛素Ｂ对猪卵母细胞去核的影响 比较不同浓度的细胞松弛素Ｂ对猪卵母细胞去核的影响。结果显示，用不同浓度CB处理后的卵母细胞的成功去核率均显著高于未处理组卵母细胞的去核率（P<0.05）；CB处理组之间的结果表明，5×10－3、6.5×10－3mg/mL浓度组的去核成功率显著高于其它两组的去核成功率（P<0.05），而卵母细胞的溃破率显著低于其它处理组和对照组（P<0.05）。CB在体外成熟培养的猪卵母细胞去核操作中能提高去核成功率，并减少卵母细胞质膜的破溃。浓度在5×10－3、6.5×10－3mg/mL较为理想。 2. 不同激活剂对猪卵母细胞化学诱导去核法去核效率的影响 用7％乙醇、10mg/L细胞松弛素B、0.1mM的氯化钙分别预激活卵母细胞后化学诱导去核。结果标明, 激活剂处理后的卵母细胞与未处理的卵母细胞形态略有差异，7％乙醇激活处理的卵母细胞染色质收缩，细胞皱缩和变形。10mg/LCB激活后的卵母细胞形态上与未处理的卵母细胞差异不显著。0.1mM的CaCl2激活后引起卵母细胞孤雌发育，发生卵裂。各组之间的去核率差异显著（P<0.05），其中，10mg/L CB激活组的去核率显著高于其它各组（P<0.05）。 3. 猪卵母细胞体外成熟培养时间及去核方法的研究 将卵母细胞的成熟培养分成不同的时间组，分别采用盲吸法和化学诱导去核法去核。结果表明，不同时间成熟培养的卵母细胞用盲吸法去核，体外成熟培养（IVM）39-41h 组去核率最高，与IVM36-38h组差异显著（P<0.05），与42-44h两组差异不明显, 但三组去核率显著高于IVM45-48h组（P<0.05）。不同时间成熟培养的卵母细胞经化学去核, IVM36-38h，39-41h，42-44h,45-48h的去核率分别为44.09％，55.58％,58.12％,36.12％。IVM42-44h去核率最高，但与IVM39-41h的去核率差异不显著（P>0.05），与其他各组之间差异显著（P<0.05）。在相同的时间组内，盲吸法的去核率比化学诱导法的去核率高。IVM42-44h，两种方法的去核率差异不显著。IVM36-38h，39-41h，45-48h两种方法的去核率差异显著（P<0.05）。显示，不同的去核方法对卵母细胞体外成熟培养时间不同；盲吸法去核的最佳时间在39-41h；化学诱导去核的时间以42-44h成熟培养为宜。 4. 猪耳成纤维细胞核移植研究 以猪耳成纤维细胞为供核体细胞，用胞质内注射法进行猪体细胞核移植。核移植48h后，重构胚的卵裂率为，盲吸法去核后的卵母细胞体细胞注入后的卵裂率为20％，化学诱导去核卵母细胞核移植后的卵裂率为25％，两者之间无显著差异(P>0.05)；两组核移植胚胎均未发育到囊胚期。