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研究背景卵巢癌是女性生殖道系统死亡率最高的肿瘤。常常被称之为“寂静的杀手”,因为在所有的妇科肿瘤中,卵巢癌很少有症状却有最高的死亡率。目前标准的初期治疗方案为:肿瘤细胞减灭术和6周期的卡铂与紫杉醇静脉联合化疗。然而,75%的患者是晚期(FIGOⅢ或Ⅳ期),虽然超过80%的患者对一线化疗有良好反应,在平均15个月后大多数患者仍将发生复发。二线化疗方案可以改善患者的生存和生活质量,但并不是治愈。对于治疗最大的限制是化疗耐药,比如铂类耐药,紫杉醇耐药等。顺铂结合双链DNA,并与DNA形成复合物,干扰DNA复制和RNA转录,最终触发凋亡。紫杉醇是有丝分裂抑制剂,稳定微管,特别结合到β-微管蛋白亚基。一些分子机制提示卵巢癌细胞耐药模型是有特征的,强调生物学复杂性:增加DNA修复活性和缺损DNA损害反应,增加抗凋亡调节活性,生长因子受体下调和翻译后的调整或改变β-微管蛋白和其他微管蛋白的调节蛋白。近来研究已经发现一些新的基因组调节因子microRNAs在肿瘤的发生和发展中有重要作用。MicroRNAs (miRNAs)是一类小分子(～22 bp)内源性非编码RNAs,主要是通过靶mRNA的3′-UTR碱基配对调节基因表达,导致翻译抑制或mRNA降解。在一些生理和病理的细胞过程中miRNA介导的转录后基因调控控制重要的生物学过程,如增殖、凋亡、代谢等。在不同的组织器官已经发现几百个miRNA,提示miRNA在生物事件中的潜在作用。在一些人类肿瘤已经报道异常表达的miRNA,与肿瘤的诊断和预后有密切的关系,将可能成为肿瘤治疗新的靶点。目前已知1/2miRNA调控基因位于肿瘤相关基因组区域或脆性基因组位点,这些基因或蛋白信号通路可能参与肿瘤细胞对化疗药物的耐药。在卵巢癌化疗耐药的miRNA特征可能发展新的治疗靶。miRNAs的治疗潜能仍然是未开拓的,已有体外实验证实miRNA的抑制物可以有效地抑制肿瘤细胞侵袭、转移。基于miRNA的肿瘤治疗方法提供了单个miRNA靶向多基因网络的途径。在患者miRNAs的输送方式也在进一步研发,期待不久进入临床试验。目的miR-199a可以通过调节靶基因mTOR(mammalian target of rapamicin)、PAK4(p21-activated kinase 4)参与肿瘤细胞的生物学行为,影响肿瘤细胞的生长,有研究表明miR-199a可能通过靶蛋白参与肿瘤细胞化疗耐药。本研究拟探讨miR-199a是否参与卵巢癌细胞株对顺铂敏感性的变化。方法使用real-tmie PCR检测OV2008和C13*细胞中miR-199a的表达。OV2008和C13*细胞中经lipo2000转染miR-199a的mimics和inhibitor,并经DDP处理,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。在OV2008和C13*细胞中转染miR-199a的mimics和inhibitor,并经不同浓度的DDP处理,CCK-8检测细胞活性。结果real-tmie PCR检测结果表明miR-199a在OV2008的表达明显高于C13*细胞(P<0.05)。转染miR-199a的mimics经DDP处理C13*细胞的凋亡率明显高于对照细胞;转染miR-199a的inhibitor经DDP处理OV2008细胞的凋亡率明显低于对照细胞。在OV2008细胞中转染miR-199a的inhibitor并经不同浓度DDP处理,与阴性对照组相比顺铂诱导的细胞毒性作用减弱;在C13*细胞中转染miR-199a的mimics并经不同浓度DDP处理,和阴性对照组细胞相比顺铂诱导的细胞毒性作用增加。结论miR-199a在OV2008细胞的表达明显高于C13*细胞,在OV2008和C13*细胞中转染miR-199a的mimics和inhibitor细胞凋亡率发生明显变化,miR-199a可能提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。目的通过脂质体转染miR-199a的mimics和inhibitor,研究miR-199a在卵巢癌OV2008和C13*细胞对顺铂敏感性的影响并探讨可能的机制。方法使用real-tmie PCR检测OV2008和C13*细胞中mTOR的表达。运用Western blot检测OV2008和C13*细胞中mTOR的表达。经lipo2000转染miR-199a的mimics和inhibitor,real-tmie PCR检测OV2008和C13*细胞中mTOR的变化;Western blot检测OV2008和C13*细胞中mTOR的变化。构建mTOR的荧光素酶载体,在OV2008细胞转染miR-199a的mimics检测其对下游靶基因的调控。结果real-tmie PCR检测结果表明mTOR在C13*的表达明显高于OV2008细胞(P<0.05)。Western blot检测结果表明mTOR在C13*细胞的表达明显高于OV2008细胞(P<0.05)。real-tmie PCR和Western blot检测结果显示转染miR-199a的mimics抑制mTOR的表达,转染miR-199a的inhibitor促进mTOR的表达。在OV2008细胞转染miR-199a的mimics和mTOR的荧光素酶载体检测结果显示miR-199a对下游靶基因是负调控的。结论miR-199a通过mTOR调控卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,参与卵巢癌细胞的铂类耐药。