半夏泻心汤调节胃肠平滑肌细胞Cx43介导的GJIC机制研究

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半夏泻心汤出自《伤寒杂病论》,具有降逆止呕,消痞散结的作用,主要用于因小柴胡汤证误下所致之“心下痞”者,及素有呕疾而兼“肠鸣,心下痞”者。伤寒大家刘渡舟先生曾对其方义这样描述:“半夏、干姜辛开而温,以散脾气之寒;黄芩、黄连苦泄而寒,以降胃气之热;人参、甘草、大枣甘温调补,和脾胃,补中气,以复中焦升降功能,此即辛开苦降甘补之法”。其在治疗胃肠运动功能障碍性疾病方面有可靠疗效,不仅受到众多伤寒名家的推崇,也一直是中医学方药实验研究的热点之一。本文着眼于探讨半夏泻心汤对胃肠平滑肌细胞Cx43介导的GJIC作用机制,以期进一步阐释本方对胃肠运动调节的分子机制及各拆方组在本方中的作用。通过获取大鼠胃肠平滑肌原代细胞,经免疫组化法鉴定后稳定培养;采用血清药理学方法分别制备半夏泻心汤及其拆方的含药血清;采用MTT法观察半夏泻心汤及其拆方各组对胃肠平滑肌细胞增殖的影响;采用RT-PCR法观察半夏泻心汤及其拆方各组对胃肠平滑肌细胞表达Cx43 mRNA、p38 MAPK mRNA、PKA mRNA、PKC mRNA的影响;采用western blot法观察半夏泻心汤及其拆方对胃肠平滑肌细胞表达Cx43、P-Cx43、p38MAPK、P-p38MAPK、PKA及PKC的影响。MTT结果为药物血清作用24h后,全方组、辛开组、苦降组、甘补组、辛开苦降组OD值高于空白组,仅甘补组、辛开苦降组与之比较,有统计学差异(P<0.05);辛开甘补组、苦降甘补组OD值低于全方组,与之比较有统计学差异(P<0.05)。药物血清作用48h后,全方组、辛开组、苦降组、苦降甘补组OD值高于空白组,与之比较有显著性统计学差异(P<0.01);辛开组、苦降组、苦降甘补组0D值高于全方组,其余各组0D值均低于全方组,且辛开组、辛开甘补组与之比较有显著性统计学差异(P<0.01),辛开苦降组与之比较有统计学差异(P<0.05)。药物血清作用72h后,各用药组0D值均高于空白组,且均具有显著性统计学差异(P<0.01);全方组OD值低于辛开组、苦降组、甘补组及辛苦苦降组,其余各组0D值均低于全方组,且辛开苦降组与之比较有统计学差异(P<0.05)。RT-PCR结果为半夏泻心汤及其拆方含药血清与空白组比较,对Cx43 mRNA基因的表达无统计学意义,但有作用趋势,其中,对其表达促进效应最佳为辛补组,其次为甘补组;对其表达抑制效应最强为辛苦组,其次分别为辛开组、苦降组、苦补组、全方组;全方组的作用效应与空白组相近,呈抑制倾向;对p38 MAPK mRNA基因的表达无统计学意义,但有作用趋势,其中,对其表达促进效应最佳为苦补组,其次分别为全方组、辛补组、苦降组;对其表达抑制效应最强为辛苦组,其次分别为苦补组、辛开组;全方组对其表达效应表现为促进倾向;对PKA mRNA基因表达无统计学意义,但有作用趋势,对其表达均表现为抑制效应,其中以辛苦组的作用最强,其次分别为甘补组、辛开组、苦补组、全方组、辛补组、苦降组;全方组对其表达效应表现为抑制倾向;对PKC mRNA基因的表达无统计学意义,但有作用趋势,对其表达均表现为促进效应,其中以苦补组作用最佳,其次分别为苦降组、辛补组、辛开组、全方组、辛苦组、甘补组。全方组对其表达效应表现为促进倾向。Western blot结果为半夏泻心汤及其拆方含药血清与空白组比较,对Cx43的表达无统计学意义,但有作用趋势,其中,对其表达促进效应最佳为苦补组,其次分别为辛补组、辛苦组、全方组、甘补组;对其表达抑制效应最强为苦降组,其次为辛开组;全方组对其表达效应呈促进倾向;对P-Cx43的表达无统计学意义,但有作用趋势,其中,对其表达促进效应最佳为辛苦组,其次分别为苦降组、甘补组、辛补组;对其表达抑制效应最强为苦补组,其次分别为辛开组、全方组;全方组对其表达的影响与空白组接近,呈抑制倾向;对p38 MAPK的表达无统计学意义,但有作用趋势,对其表达效应均为抑制倾向,作用最强为辛开组,其次分别为苦降组、甘补组、苦补组、辛补组、辛苦组、全方组;全方组对其表达的影响与空白组接近,呈抑制倾向;对P-p38 MAPK的表达无统计学意义,但有作用趋势,其中,对其表达促进效应最佳为辛苦组,其次分别为甘补组、辛开组、全方组;对其表达抑制效应最强为苦补组,其次分别为辛补组、苦降组;全方组对其表达的影响与空白组接近,呈促进倾向;对PKA的表达无统计学意义,但有作用趋势,其中,对其表达促进效应最佳为辛苦组,其次分别为辛补组、苦补组;对其表达抑制效应最强为全方组,其次分别为辛开组、甘补组、苦降组,全方组对其表达呈强抑制效应;对PKC的表达无统计学意义,但有作用趋势,其中,对其表达促进效应最佳为苦降组,其次为全方组;对其表达抑制效应最强为苦补组,其次分别为辛苦组、辛开组、甘补组、辛补组;全方组对其表达呈促进倾向。以上结果均说明,半夏泻心汤及其拆方可能通过促进或抑制胃肠平滑肌细胞表达Cx43、Cx43 mRNA及相关磷酸化蛋白,上调或下调p38 MAPK、PKA、PKC信号转导通路来发挥其调节胃肠平滑肌收缩运动的作用。
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