绵羊瘤胃内纤维素分解菌的分离鉴定及白色瘤胃球菌纤维素酶celB基因的克隆

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本实验首先通过滤纸溃烂法,从羊的瘤胃液中筛选出分解纤维素的厌氧细菌菌群,对其中分解纤维素能力最强的4株细菌(分别编号为H1、H2、H3、H4),通过形态学特征和生理生化特性等等进行了鉴定,结果初步鉴定为产纤维二糖梭菌、黄色瘤胃球菌、白色瘤胃球菌、产琥珀酸丝状杆菌。根据GenBank中已登录的白色瘤胃球菌中纤维素酶celB序列,自行设计引物,片段大小为407bp,以上述分离并初步鉴定的白色瘤胃球菌总DNA为模版,经PCR扩增,利用pMD19-T将其克隆入E.coli DH5α,经蓝白斑筛选和质粒PCR鉴定后,筛选获得阳性重组克隆体pMD19-T-celB。核苷酸序列测定分析表明,与GenBank中登录的白色瘤胃球菌中纤维素酶celB序列同源性为98%,为进一步研究纤维素酶提供了实验基础。
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