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目的:在成功建立肿瘤大鼠化疗痛模型的基础上,探讨天麻素能否在不影响长春新碱抗肿瘤作用的前提下,抑制化疗痛的发生发展,并对其作用机制进行初步研究。 方法: (1)建立乳腺癌大鼠化疗痛模型。挑选合格的SD大鼠30只,随机区组分为对照组,肿瘤模型组,长春新碱组。对照组腋下注射0.2ml1640培养基,肿瘤模型组与长春新碱组腋下接种0.2ml(5*106个)Walker-256乳腺癌细胞,此外长春新碱组于造模第7天隔天腹腔注射长春新碱125μg/kg,共4次,余两组腹腔注射生理盐水。行为学检测大鼠机械痛与热痛阈值,HE染色观察三组大鼠腋下组织形态。 (2)天麻素对肿瘤大鼠化疗痛的抑制作用及其机制研究。按痛阈值大小将50只大鼠随机区组分为对照组,肿瘤模型组,长春新碱组、天麻素低剂量组及天麻素高剂量组。按照上述方法建立肿瘤大鼠化疗痛模型,天麻素低剂量组及天麻素高剂量组第15天开始腹腔注射天麻素。并于第0、7、14、21天行为学检测大鼠机械痛与热痛阈值;第21天给药结束后处死大鼠,称瘤重,计算抑瘤率((对照组瘤重-给药组瘤重)/对照组瘤重×100%);Elisa试剂盒检测脊髓中TNF-α和IL-1β的表达;免疫组化检测脊髓小胶质细胞标志物Iba-1的表达; Western blot测定CX3CR1、CX3CL1、P38MAPK、P-P38MAPK蛋白表达变化。 结果: (1)建立乳腺癌大鼠化疗痛模型。行为学结果显示肿瘤模型组机械痛阈值及热痛阈值与正常组比较并无明显差别。造模后第7天给予长春新碱,其痛阈值显著降低,与正常、肿瘤模型组相比差异有统计学意义;腋下组织 HE染色结果显示,与正常组比较,肿瘤模型组镜下可见大量肿瘤细胞,呈浸润性生长,异型性明显,长春新碱组肿瘤细胞出现核固缩核溶解现象,提示长春新碱可抑制肿瘤细胞的生长。 (2)行为学结果显示,肿瘤大鼠化疗痛模型造模成功后,VCR组相对于正常组和肿瘤模型组机械痛阈值显著下降,差异有统计学意义。给予天麻素治疗后,其机械痛阈值和热痛阈值上升明显,与 VCR组相比差异有统计学意义。 (3)实验结束时各组大鼠肿瘤生长情况,与肿瘤模型组肿瘤比较,VCR及天麻素组治疗后,肿瘤均有不同程度的减小,差异有统计学意义;高剂量天麻素与长春新碱联合使用后,其抑瘤率较单独使用长春新碱明显提高。 (4)ELISA结果显示,相对于正常组及肿瘤模型组,VCR组中TNF-α的表达明显增高,给予天麻素治疗后,TNF-α表达有所降低,差异有统计学意义,且高剂量组降低显著。相对于正常组及肿瘤模型组,VCR组中IL1-β表达明显增高,给予天麻素治疗后,IL1-β表达有所降低,差异有统计学意义,且高剂量组降低显著。 (5)免疫组化结果显示,与正常组相比,肿瘤模型组小胶质细胞标记物Iba-1的表达均有所升高,给予VCR后其小胶质细胞活化明显,用天麻素治疗后,Iba-1的活化有所降低。 (6) Western blot结果显示,与正常组相比,肿瘤模型组和长春新碱组脊髓内的CX3CR1,CX3CL1和P-P38MAPK蛋白表达均有所上升,差异有统计学意义。与长春新碱组相比,天麻素高低剂量组中脊髓内CX3CR1,CX3CL1和P-P38MAPK蛋白表达均有所下降,差异有统计学意义。 结论: 1、乳腺癌大鼠化疗痛模型建立成功。 2、天麻素可在不影响长春新碱抗肿瘤作用的前提下,抑制化疗痛的发生发展,且其机制可能与小胶质细胞活化通路有关。