急性肝损伤(acute liver injury,ALI)是一种可引起肝功能快速丧失,并伴有严重炎症的疾病。该病发生快,病情危急,肝细胞受损严重,甚至可以危害其他系统。临床上能够引起急性肝损伤发生的因素有很多,主要包括药源性、过量摄入酒精、病毒性感染以及误服有毒食品等。目前,对于急性肝损伤的治疗并没有特效的药物和方法,但是炎症反应被认为可以加重急性肝损伤的发展,或许控制急性肝损伤中的炎症反应可能是保护急性肝损伤的有效途径之一。锌指E盒结合同源框2(Zinc finger E-box Binding homeobox 2,ZEB2)作为上皮-间充质-转换(EMT)过程中的重要调节剂,也是分化和发育事件的关键调节因子,目前ZEB2与人类肿瘤之间的关系已经被广泛的报道,通过对E-cadherin表达的调节,促进了肿瘤细胞从上皮细胞表型转化成为间质细胞表型,使得细胞之间的粘附力降低,从而获得了侵袭和迁徙的能力,并最终转移到其他的组织和器官,这在直肠癌、胃癌、鼻咽癌等多种恶性肿瘤的发展中发挥着重要的促进作用。此外,ZEB2还可以通过调控Cyclin D1、Rb等基因加速肿瘤细胞的增殖,研究表明在ZEB2的表达受到干扰时,细胞周期G1期向S期的转化受到阻滞,细胞的体外增殖、迁徙和侵袭能力显著下降。Barbu EA等人发现ZEB2可以调节FcεRI来诱导的肥大细胞中NFAT的活化,其中NFAT控制着多种细胞进程和白介素以及TNF-α的转录,是FcεRI激活诱导的肥大细胞存活的关键,并且前期我们也发现ZEB2在急性肾损伤中可以通过IκB激酶的降解和磷酸化来抑制核因子κB(NF-κB)信号,从而导致炎性细胞因子水平的显着降低。丹皮酚衍生物DPF-6,是一种以丹皮酚为先导物设计合成的丹皮酚衍生物。我们的前期研究发现丹皮酚衍生物DPF-6在LPS刺激的RAW264.7细胞炎症模型中具有抗炎效果。本课题在LPS/D-Gal构建小鼠急性肝损伤动物模型和LPS刺激L-02细胞模型中探讨了丹皮酚衍生物DPF-6对急性肝损伤的保护作用及可能机制。为此,我们开展以下实验研究:(1)丹皮酚衍生物DPF-6在动物急性肝损伤中的保护作用在LPS/D-Gal联合诱导的动物急性肝损伤中,给予丹皮酚衍生物DPF-6,肝组织HE染色,观察肝组织的病理学改变,采用试剂盒检测ALT/AST的血清水平,qRT-PCR方法检测炎症因子和ZEB2的表达。结果显示为:与模型组相比,丹皮酚衍生物DPF-6在25、50和100mg/kg浓度的时候降低血清ALT/AST水平,改善了病理组织学改变,抑制了TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌并促进了肝ZEB2的表达。(2)丹皮酚衍生物DPF-6在LPS诱导的L-02细胞中对炎症因子和ZEB2表达的影响设置25、50和100μM浓度的丹皮酚衍生物DPF-6,干预LPS刺激的L-02细胞炎症模型,通过qRT-PCR,Western blot观察炎症因子和ZEB2的表达,结果显示为:与LPS刺激组相比,丹皮酚衍生物DPF-6在25、50和100uM浓度的时候,抑制TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌,促进ZEB2的表达。(3)通过基因重组技术构建ZEB2过表达质粒针对ZEB2基因,基因重组技术构建重组真核表达载体pEGFP-C2-ZEB2,通过基因测序以及将其转染到293T细胞中再通过Western blot检测,结果显示为:基因测序后发现与GencBank中公布的序列一致,发现转染pEGFP-C2-ZEB2重组质粒的293T细胞中出现ZEB2蛋白的明显表达。(4)ZEB2调控炎症因子分泌的可能机制的影响以及对JNK通路的影响在LPS刺激的L-02细胞炎症模型中,采用pEGFP-C2-ZEB2、pEGFP-C2-vector、siRNA-ZEB2和siRNA-NC进行转染,通过qRT-PCR,Western blot检测炎症细胞模型中JNK信号通路的状态以及炎症因子的分泌,结果显示为:与LPS刺激组相比,抑制ZEB2可以进一步促进JNK活化和炎症因子的分泌,过表达ZEB2可以抑制JNK活化和炎症因子的分泌。以上结果显示,丹皮酚衍生物DPF-6可能是通过调控ZEB2的表达来调节JNK信号通路的活化从而抑制炎症因子的分泌,进而对急性肝损伤发挥保护作用。