中药健脾养胃方治疗胃癌作用机理的研究

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目的:胃癌(Gastric Cancer)是消化道最常见恶性肿瘤之一。世界范围内最常见恶性肿瘤中胃癌居第四位。中国是胃癌高发地区,患者几乎占全球胃癌患者的一半,发病有年轻化趋势,严重威胁人类健康。中药健脾养胃方在临床上对胃癌的术后复发预防、改善症状、减少副反应及延长生存期方面均取得较好效果。但是其在肿瘤的治疗中其作用地位、作用点、作用效应强度依然受到质疑,其抗肿瘤的确切机理尚未完全明确,需要有更大量确切的现代医学数据支持及阐明。因此,本实验目的就是分析中药健脾养胃方,探讨其治疗胃癌的细胞和分子生物学作用机理,为临床应用提供科学数据和指导。方法:1采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术分析鉴定健脾益胃方水提液和醇提液中的有效化合物成分;2以SGC-7901胃癌细胞株进行体外细胞学试验,采用MTT试验、Transwell试验及流式细胞技术,研究研究健脾养胃方对肿瘤细胞的增殖、侵袭、凋亡及周期等几方面的作用,并以抗肿瘤药物作为阳性对照。3以荷瘤裸鼠和SGC-7901胃癌细胞株进行体内动物性试验,制作胃癌移植瘤模型,采用病理组织切片、免疫组化和Western Blotting检测基因表达技术,研究健脾养胃方干预后的病理组织中胃癌相关分子的表达。结果:1LC-MS技术分析:健脾养胃方水提液和醇提液处方中均至少含有一定量要鉴定的有效成分。在同一药物浓度下,醇提液各化合物含量多高于水提液。2体外细胞学实验:①健脾养胃方组在一定浓度范围内,对细胞增殖有显著的抑制作用,抑制率呈正向梯度改变,与空白组相比,P<0.01;②健脾养胃方干预组穿过Transwell微孔滤膜的细胞数(67.3±18.3)明显低于对照组(229.7±40.2),P<0.0l③健脾养胃方组细胞凋亡率显著高于对照组,尤以晚期凋亡较为明显(P<0.01)。④健脾养胃方组S期缩短,G2/M期则延长。3体内动物学实验:①与对照组相比,健脾养胃方组可延缓裸鼠体重下降。②健脾养胃方可以减少Ki67的表达;③与对照组相比健脾养胃方显著减少MMP-9的表达(P<0.01);④健脾养胃方可以减少Bcl-2的表达;⑤与对照组相比,健脾养胃方可以减少VEGF的表达(P<0.01);⑥与对照组相比,健脾养胃方可减少PI3K、pAKT、NF-κB的表达(P<0.01);⑦健脾养胃方可以激活抗癌基因和抑制癌性基因的表达,如增加PTEN蛋白的表达(P<0.01),降低CXCR2的表达。结论:药物提取,醇提效率明显优于水提,体内外实验研究表明,健脾益胃方中具有一定含量的多种有效化合成分,发挥多种抗肿瘤效应。其机理有:抑制肿瘤细胞的增殖,降低肿瘤细胞的侵袭力,诱导肿瘤细胞的凋亡,阻滞肿瘤细胞周期,干扰PI3K-AKT细胞信号通路,抗血管生成,抑制癌基因和诱导抗癌基因等多种作用。健脾养胃方值得临床推广应用。
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