基于自组装寡肽的麦芽糖功能化微纳米材料的制备及其在富集分离中的应用

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微纳米材料的表面功能化对于拓宽其应用有着重要意义。目前材料的表面功能化大都是基于化学键合,存在表面依赖性强,步骤繁琐、耗时长和条件苛刻等问题。本论文利用麦芽糖修饰的自组装寡肽(寡肽序列为:Ala-Glu-Ala-Glu-Ala-Lys-Ala-Lys,简写作:AEK8-maltose),对不同微纳米材料进行表面麦芽糖功能化,并应用于复杂生物样品中糖肽的富集和亲水作用色谱(HILIC)的分离。全文包括以下两方面的工作:一、发展了一种基于自组装寡肽的表面一步麦芽糖功能化方法,并对所制备的麦芽糖功能化磁性纳米复合材料在糖肽富集中的性能进行研究。二、基于AEK8-maltose对二氧化硅微球进行麦芽糖功能化,用作麦芽糖型HILIC固定相,探究了 HILIC模式下不同色谱条件对溶质保留行为的影响,并对不同极性化合物实现分离。本论文主要包括以下三部分:第1章绪论本章主要对糖肽富集方法和HILIC分离技术方面进行了归纳和总结。首先阐述了糖蛋白组学的研究意义和相关性质,介绍了糖肽富集的常用方法和基质材料,以及寡肽的自组装机理等。其次总结了 HILIC的特点、发展和应用、固定相类型及其保留机理研究等。最后简要介绍了本论文的立题依据和研究内容。第2章基于自组装寡肽的麦芽糖功能化磁性纳米复合材料及其对糖肽富集性能的研究本章发展了一种简单快速的表面功能化方法,通过AEK8-maltose在温和条件下于SiO2@Fe3O4和C@Fe3O4磁性纳米复合材料表面一步自组装形成以β-折叠为主的稳定涂层,制备了 AEK8-maltose功能化磁性纳米复合材料并应用于复杂样品中糖肽的富集。详细考察了该麦芽糖功能化磁性纳米复合材料对标准糖蛋白辣根过氧化酶(HRP)和人体免疫球蛋白(IgG)酶解产物中糖肽的富集性能。实验证明,该材料富集速度快(孵育5 min,洗脱2 min),灵敏度高(0.001 ng/μL),选择性好(HRP:BSA,1:150),具有良好的稳定性和可再生性,并成功应用于实际样品人血清酶解液中糖肽的富集。第3章基于自组装寡肽的麦芽糖功能化硅胶HILIC固定相及其对极性化合物的分离应用本章以羰基二咪唑(CDI)作为交联剂,将AEK8-maltose键合于硅胶表面制得麦芽糖型HILIC固定相。与传统糖类固定相相比,该方法步骤相对简单,避免了耗时的过程。在HILIC模式下,初步考察了不同的流动相组成、盐浓度、pH值和温度对溶质保留行为的影响。实验结果证明,其保留机制与典型的HILIC保留相匹配。该麦芽糖型HILIC柱在分离氨基酸、碱基与核苷、水溶性维生素、水杨酸及其类似物等极性化合物中表现出良好的分离效率和柱稳定性。此外,在寡糖的分离中也实现了很好的选择性。
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