鸡传染性支气管炎病毒抗原表位的筛选及鉴定

来源 :首都师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:rechardfeng
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鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis, IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)引起鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病。本研究利用噬菌体随机展示肽库技术筛选出IBV的2个抗原模拟表位,将获得的抗原模拟表位序列展示于大肠杆菌鞭毛蛋白的硫氧还蛋白区,重组大肠杆菌能与IBV阳性血清呈特异性反应。本研究为进一步研究鸡传染性支气管炎新型疫苗和新型诊断技术奠定基础。利用辛酸—硫酸铵法纯化的IBV阳性鸡血清IgG作为靶分子,对噬菌体展示随机12肽库进行筛选。三轮生物淘洗后,目标噬菌体获得了125倍富集。从中随机挑选50个噬菌体克隆进行扩增,用ELISA法检测其与IBV阳性血清的结合活性,结果获得22个阳性克隆。对阳性克隆提取ssDNA进行测序分析,并经过竞争抑制ELISA鉴定,确定带有KSPKHSSSALHF和SIIQMNLHRPTS这2个短肽序列的噬菌体克隆可与IBV阳性血清结合,并对IBV抗原有竞争抑制作用。将这两种序列与GenBank中已发表的IBV氨基酸序列比较,未发现有同源性。提示这两个肽可能是IBV的抗原模拟表位。应用基因工程技术,将编码KSPKHSSSALHF和SHQMNLHRPTS的DNA片段分别插入质粒pFliTrx,成功构建重组展示载体p1和p2,并分别转化大肠杆菌G1826,形成展示IBV模拟抗原表位肽的重组菌F1和F2。体外抗原抗体反应试验表明重组菌F1与F2可以与IBV阳性鸡血清特异性结合。提示得到的2个抗原模拟表位在脱离噬菌体后,仍具有与IBV抗体结合的生物学活性。研究结果初步表明,鉴定出的2个IBV抗原模拟表位可作为候选表位,对研制新型鸡传染性支气管炎病毒诊断试剂及疫苗具有潜在的应用价值。
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