维氏气单胞菌（Aeromonas.veronii.A.veronii）是一种人兽共患细菌,在广泛的温度和盐度范围都能存在,可以感染水生动物、陆生动物以及包括人类在内的哺乳动物,对公共卫生造成了巨大的威胁。脂蛋白（LPP）是细菌外膜的结构成分,对维持细胞膜的完整性有重要的作用;研究发现,LPP也参与了细菌的一些毒力过程如黏附,在细菌入侵的初期阶段发挥着关键作用。然而,A.veronii中LPP的研究较少,LPP对A.veronii的作用尚不清楚,本课题的目的是研究A.veronii中的LPP在该菌中的功能性作用,为A.veronii的致病机制研究以及为研发预防该菌的相关疫苗提供新思路。首先,在全基因组测序的基础上,对脂蛋白基因（Lpp）进行原核表达,获得目的蛋白LPP,经纯化鉴定,免疫新西兰大白兔制备LPP抗血清研究其抗菌效应。通过PCR扩增Lpp基因,连接至p ET-32a（+）载体,构建重组质粒p ET-32a（+）-Lpp。重组质粒p ET-32a（+）-Lpp转化感受态细胞BL21（DE3）,用终浓度为1 m M的IPTG诱导表达。表达产物经His标签镍离子蛋白纯化柱纯化,并采用SDS-PAGE和Western blot鉴定。纯化的重组脂蛋白LPP免疫兔后制备抗血清,制备的抗血清皮下接种小鼠。结果显示,经酶切鉴定和序列测定发现重组质粒p ET-32a（+）-Lpp构建成功;SDS-PAGE检测显示重组蛋白LPP分子量约为69 Ku;Wetern blot显示纯化后的重组蛋白LPP为单一条带;ELISA结果显示制备的抗血清的效价为1:102400。结果表明本研究成功制备了LPP抗血清,该抗血清可以提高感染小鼠的生存率,减少脾脏荷菌量,对小鼠有一定的保护作用。其次,本研究通过同源重组缺失Lpp基因,构建Lpp基因缺失株ΔLpp,并通过功能性互补构建互补株C-Lpp。通过PCR扩增Lpp基因的上下游同源臂后通过重叠PCR连接,连接至克隆载体p MD18-T,转化DH5α,结果显示重组克隆载体p MD18-T-L-12构建成功。之后连接Pre112自杀性质粒,依次转化DH5α-λpir、WM3064感受态细胞,结果显示重组自杀性质粒Pre112-L-12构建成功。测序成功的菌液作为供体菌和受体菌野生株WT结合转移,并筛选鉴定。q RT-PCR结果显示Lpp基因未表达;遗传稳定性结果显示ΔLpp可以稳定遗传。扩增含有启动子序列的Lpp基因,连接至克隆载体p MD18-T,转化DH5α,结果显示重组克隆载体p MD18-T-L-3构建成功。之后连接PBBR表达质粒,转化DH5α,结果显示重组表达载体PBBR-L-3构建成功。测序成功的菌液作为供体菌和受体菌缺失株ΔLpp结合转移,并筛选鉴定。q RT-PCR结果显示Lpp基因表达量约是WT的11倍;遗传稳定性结果显示C-Lpp可以稳定遗传。综上结果,本实验成功构建了A.veronii的脂蛋白缺失株ΔLpp和互补株C-Lpp,可以用于接下来的实验。最后,本实验对ΔLpp和C-Lpp的生物学特性进行了分析。结果显示,ΔLpp和WT的生长速度相似,溶血活性没有明显变化,但ΔLpp的生物膜形成能力降低,鞭毛缺失,游动能力减弱,感染小鼠脾脏内的菌落数显著减少,细菌对小鼠的半数致死量升高;C-Lpp的生物学特性得到一定的恢复,但鞭毛部分缺失,游动能力减弱。结果表明,Lpp基因的缺失降低了A.veronii对小鼠的毒力,影响了该菌的致病性。综上,本实验制备的LPP抗血清可以有效的保护小鼠抵抗A.veronii的感染,此外,LPP参与了A.veronii的致病性,并发挥着关键的作用,该研究为揭示A.veronii的致病机制及研发抵抗该菌的保护性疫苗奠定了良好的基础。