论文部分内容阅读
藏猪是高原特有的小型猪种,具有适应高原寒冷、紫外线强、抗逆性强以及对低氧适应性的特质。抗黏液病毒1(Myxovirus resistant1,Mx1)是广谱抗病毒蛋白,受干扰素诱导表达影响,在多种抗病毒感染过程中表达。本试验利用RT-q PCR技术检测了高原藏猪与引进大约克猪两个品种猪的Mx1基因表达量,使用ELISA法检测猪血清中参与诱导Mx1基因的IFN-α浓度水平。结果显示,在肝脏和脾脏组织中藏猪Mx1基因表达量均极显著高于大约克猪(P<0.01),在两个品种猪血清中IFN-α浓度水平与Mx1基因表达水平趋势一致,且藏猪血清中IFN-α水平极显著高于大约克猪(P<0.01)。在同一环境下,藏猪的IFN-α水平与所诱导的Mx1基因较大约克猪表达更高,表明同一环境下藏猪较大约克猪具有更强免疫水平。在不同饲养环境下,藏猪的肝脏、脾脏及肺脏组织中Mx1基因相对表达量趋势一致,均为舍饲环境下藏猪Mx1基因表达极显著高于半舍饲与放牧藏猪(P<0.01)。藏猪血清中IFN-α水平与Mx1基因表达趋势一致,呈正相关性,舍饲环境显著高于半舍饲与放牧藏猪(P<0.05)。半舍饲藏猪IFN-α水平与Mx1基因表达较放牧藏猪差异不显著(P>0.05)。不同饲养环境下藏猪Mx1基因表达量有所差异,这可能与藏猪饲养环境的通风条件、猪群密度、人员接触等因素有重要的关系。分别使用猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)弱毒苗、口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)灭活苗和猪伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)弱毒苗接种PK15细胞,诱导细胞中Mx1基因的表达。在0-6 h内细胞中Mx1基因表达量较低,且PRRSV-PK15、FMDV-PK15和PRV-PK15中Mx1基因的表达量均与对照组差异不显著(P>0.05)。6 h之后,PRRSV-PK15、FMDV-PK15和PRV-PK15三组的PK15细胞中Mx1基因的表达量呈逐渐上升趋势。PRRSV诱导的PK15细胞在30 h时检测到Mx1基因表达量较对照组差异显著(P<0.05)FMDV诱导的PK15细胞在24 h时检测到Mx1基因相对表达量较对照组差异显著(P<0.05),在36 h时检测FMDV诱导细胞中Mx1基因相对表达量较对照组差异极显著(P<0.01);PRV诱导的PK15细胞在18h时检测到Mx1基因相对表达量较对照组差异极显著(P<0.01)。PK15细胞内Mx1基因的表达因受到不同病毒及其毒力强弱、剂量浓度等因素影响,细胞内Mx1基因的表达量有所不同,但表达趋势一致,即0-6 h内细胞中Mx1水平较低,6 h之后细胞内Mx1基因表达快速上升,在36 h内细胞中的Mx1基因表达呈持续上升的趋势。PK15细胞受到PRRSV、FMDV和PRV诱导细胞内Mx1基因表达上调,在细胞内具有抗PRRSV、FMDV和PRV的活性,即Mx1是一种广谱抗病毒蛋白,在多种病毒侵入过程中受到诱导而表达,可能起到重要抗感染的作用。利用测序技术在藏猪Mx1基因的蛋白编码区发现4个有义突变位点,分别是C867G、A923C、A1240G和C1324A,且大约克猪仅在A1240G和C1324A两个位点存在多态性。藏猪在C867G、A923C和A1240G突变位点的等位基因频率极显著高于大约克猪(P<0.01)。C867G位点编码第289位氨基酸,由天冬氨酸被取代为谷氨酸;A923C位点编码第308位氨基酸,由谷氨酸被取代为丙氨酸;A1240G位点编码第414位氨基酸,由赖氨酸被取代为谷氨酸;C1324A位点编码了第442位氨基酸,由精氨酸被取代为甘氨酸。藏猪与大约克猪Mx1基因的CDS区相对不保守,存在较多突变位点。结果表明,猪Mx1基因CDS区突变位点导致编码Mx1蛋白质的氨基酸发生改变,这可能造成个体与品种间Mx1基因受病原诱导表达水平与对病毒抑制能力产生差异。综上所述,IFN-α参与诱导的Mx1基因表达,且呈正相关性。在不同品种、不同饲养环境以及不同的病原感染均可诱导Mx1基因不同程度的差异性表达。Mx1基因CDS区突变造成所编码Mx1蛋白质的氨基酸被替换,这可能是导致猪个体间与品种间抗病力与免疫水平有较大差异性的原因。