癌症的死亡率与发病率已经成为世界及中国疾病死亡的主要原因,发展各种癌症的早期诊断的有效方法,对于减少癌症死亡率有重要作用。本文采用了单分子阵列分析技术(Simoa),选择液体活检为检测途径,对各种不同的癌症标志物发展了相应的Simoa检测方法。主要工作如下:1.以癌症蛋白标志物AFP为研究对象,从检测原理、可行性、标准曲线、血清验证以及选择性这五个方面进行了分析,在单分子水平上进行了AFP浓度的测定,建立了AFP的Simoa测定方法。其中,AFP的Simoa检测方法,灵敏度非常高,对AFP的检测限为1.24 pg/mL,检测范围为2.33~1771.09 pg/mL,较传统ELISA方法最低检测浓度低了100倍。在血清梯度稀释的检测中,血清中测得的AFP浓度与稀释比例呈良好的线性关系;对于加标回收,其回收率均在有效范围内(70%~130%)。检测方法对干扰物的响应远低于对目标物AFP的信号,表现出较高的选择性。以上结果表明AFP的单分子检测方法成功地建立,并且达到了高灵敏度高选择性的水平,有望用于癌症患者的血清检测。2.在AFP单分子检测方法的基础上,发展了癌症标志物YKL40以及HE4的Simoa方法。Simoa方法对YKL40的检测限为4.6 pg/mL,检测范围为5.89~1010.95 pg/mL。对HE4的检测限为16.6 pg/mL,检测范围为29.2~9365.82pg/mL。Simoa方法对二者在检测灵敏度上较ELISA都有一个较大的提高,并降低了最低检测浓度。Simoa在血清中检测YKL40与HE4,检测浓度与稀释比例呈现出良好的线性关系,加标回收率均在有效范围(70%~130%)内。此外,方法的对目标物的检测表现出较好的选择性。基于Simoa技术对YKL40与HE4的检测方法,表现出了非常高的灵敏度、良好的选择性以及在血清中应用的可行性。