高产江西烯酮酯发酵条件及超高效液质联用定量检测的研究

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目的:通过金属盐添加优化其发酵培养条件,提高江西烯酮酯的产量;优化江西虫草抗肿瘤活性次生代谢产物江西烯酮酯的超声波辅助提取条件,并建立其超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用定量检测方法。  方法:考察不同金属盐对江西烯酮酯产量的影响,筛选出效果最好的金属盐,然后通过对添加时间、添加浓度等进行优化,确定最适发酵条件,提高江西烯酮酯的产量;采用四因素三水平正交试验,对超声波辅助提取江西烯酮酯的提取溶剂(A)、液料比(B)、提取次数(C)及提取时间(D)进行优化;采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用(UPLC-MS/MS),多反应监测(MRM)模式,建立了江西烯酮酯的定量检测方法。  结果:通过筛选,硫酸亚铁提高江西烯酮酯产量的效果最为明显,对其添加时间和浓度进行优化,证明在第8天添加4.8 mM硫酸亚铁可使江西烯酮酯产量达到376.92±15.33μg/g,是对照组产量的3.40倍;最佳超声波辅助提取条件为20倍量水饱和正丁醇提取2次,每次60min;液质联用定量检测方法在0.49 ng/mL~125 ng/mL内线性关系良好(R=0.9994),方法定量限为0.49ng/mL,检测限为0.25 ng/mL,回收率在95.1%~100.1%之间,相对标准偏差在5.05%~7.87%之间。  结论:证明硫酸亚铁添加能够有效提高江西烯酮酯的产量,此方法操作简便有效,成本低,便于大规模生产;采用超声波辅助萃取-超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用的方法,对江西烯酮酯进行提取及定量检测,该方法定性定量准确、灵敏度高、重复性好,能够满足江西烯酮酯定量分析的需要。
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