背景:脂肪基质血管片段(stromal vascular fraction,SVF)是脂肪组织内重要的异质细胞群,在组织再生领域中发挥着重要作用,如脂肪移植,创面愈合等。目前,SVF的分离方法主要分为两大类,即酶消化法和机械法。酶消化法是分离SVF的常用方法,但此类方法不仅耗时长,成本高且存在一定的安全隐患。机械法分离SVF普遍存在产量低的问题,且可能改变SVF的细胞表面标志物,减少SVF细胞群中祖细胞含量,从而影响细胞的生物学功能。现有的分离技术存在着诸多问题,因此目前尚无标准化分离SVF的方法。目的:本文引入超声机械力,利用超声力介导的空化效应,破坏细胞与组织之间的紧密连接,使脂肪组织匀化,增加脂肪组织的总表面积,从而减少消化过程中胶原酶的用量及分离时间。方法:采用不同超声力、超声时间、消化时间、胶原酶用量的组合,对脂肪组织进行处理,并采用细胞计数及台盼蓝染色方法对得到的细胞进行细胞产量和细胞活性评价。采用流式细胞术对两种方法分离的SVF的细胞主要成分进行比较。采用cck8方法评价细胞的增殖能力。采用多向诱导分化评价细胞的成脂、成骨、成软骨分化潜能。采用可示踪动物扩张模型评价SVF在长期皮肤扩张中的作用。结果:1.与对照组(0.20%胶原酶消化60 min)相比,脂肪组织先经95 W-20 k Hz的超声处理30 sec后,再用0.15%的胶原酶消化30 min得到的细胞数量和细胞活性显著提高,且减少了胶原酶的用量,并大大缩短了分离时间,我们将上述方法命名为超声辅助分离技术(ultrasound-assisted SVF isolation,USASI)。2.采用流式细胞术对两种方法分离的SVF的细胞组成进行比较,发现超声的介入未对SVF中的主要细胞组分的比例造成影响。3.对SVF细胞进行传代处理后,采用cck8方法评价细胞的增殖能力,USASI方法与对照组分离的细胞在增殖能力方面无显著性差异。4.采用分化诱导培养液对传代细胞进行成脂、成骨、成软骨分化诱导,USASI方法与对照组分离的细胞在多向分化潜能上无显著性差异。5.将荧光素酶(luciferase;luc)标记的脂肪组织移植到Lewis大鼠的背部皮下,对大鼠背部皮肤行扩张术,示踪结果发现在扩张皮肤中含有luc阳性细胞,且在皮肤中存在Luc/Dlk1和Luc/PDGFRα双阳性信号。结论:本研究发现了一种分离SVF的新方法,其可在不影响SVF活性及其细胞特性的前提下,缩短SVF制备时间,减少胶原酶用量,提高细胞产量,为SVF的分离提供新的思路。同时,SVF作为脂肪组织的重要细胞群,为阐明脂肪组织促进皮肤再生提供了科学的理论依据。