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近几年来,作为组织和器官发育的重要调控者,Hippo信号通路成为了研究的热点。Hippo信号通路首先在果蝇中发现,并且在哺乳动物中也是高度保守的,它能够控制器官大小。Hippo信号通路是一系列的激酶级联反应,Lats2作为其中的一个核心激酶,通过与下游的转录辅助因子YAP和TAZ相互作用从而对细胞的增殖和凋亡发挥调控作用。尽管在各种组织器官中对Lats2和Hippo信号通路的调控功能的研究已经较为深入,但是很少有报道涉及Lats2和Hippo信号通路对脂肪组织发育的调控功能。然而,脂肪组织对于机体又是十分重要的,它能调节机体能量代谢平衡,因此有必要对其发育调控进行深入和系统的研究。本课题的研究目的在于揭不Lats2以及Hippo信号通路对于脂肪发育的调控作用。首先,我们研究了在前体脂肪细胞中过表达Lats2对其下游因子的影响。我们成功构建了Lats2真核表达载体并转染细胞获得稳定整合Lats2CDS区的细胞系,Western blot检测显示Lats2高水平表达并且其活性形式p-Lats2也呈现出高水平,并且通过免疫荧光检测出Lats2主要定位在细胞质。Lats2激活后导致其下游的转录辅助因子YAP和TAZ的磷酸化水平升高并且滞留在细胞质。接下来我们研究了Lats2对于前体脂肪细胞增殖的调控。免疫荧光和定量PCR检测表明,由于YAP和TAZ滞留在细胞质不能进入到细胞核,导致它们不能与TEAD3进行相互作用,从而使得与细胞增殖和存活相关的Hippo信号通路的下游靶基因的表达水平下降,最终会导致细胞生长缓慢。通过细胞增殖和细胞周期分析我们证实了Lats2过表达导致前体脂肪细胞的增殖减缓。我们又研究了Lats2对于前体脂肪细胞分化的调控。在3T3-L1前体脂肪细胞分化过程中(0-8天),Lats2基因的表达水平呈现出上调的趋势,这一趋势与其他调控脂肪细胞分化的关键转录因子的表达趋势是基本一致的。荧光素酶报告基因和Western blot检测表明,过表达Lats2后PPARγ的转录激活作用增强,PPARγ的靶基因表达上调。诱导分化实验结果表明Lats2能够促进脂肪细胞分化。此外,我们分析了在前体脂肪细胞中Lats2对Wnt信号通路的作用。Western blot显示其部分成员在3T3-L1前体脂肪细胞分化过程中(0-8天)呈现出下调的趋势,表明在分化过程中Wnt信号通路是受到抑制的,这一抑制可能部分地是通过Lats2的上调来实现的。过表达Lats2后,磷酸化DVL2的水平下降从而β-catenin的蛋白水平有所降低。荧光素酶报告基因和Western blot检测表明TCF的转录激活作用减弱,使得Wnt信号通路的靶基因的表达下调。这些结果表明Lats2对Wnt信号通路有一定的抑制作用。已知Wnt信号通路对脂肪细胞分化有抑制作用,因此Wnt信号通路可能是Lats2调控脂肪发育的另一分子机制。总之,Lats2通过Hippo信号通路对脂肪细胞的增殖和分化进行调控。Lats2是脂肪发育的重要调控因子,调控着增殖和分化之间的平衡。