<'131>Ⅰ-Herceptin对乳腺癌放射免疫显像和治疗的实验研究

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本研究分为二部分: 第一部分:<'131>I-Herceptin对乳腺癌细胞株的放射免疫治疗 目的:(1)获得高标记率和纯度的<'131>I-Herceptin。(2)了解<'131>I-Herceptin对高表达Her-2基因的乳腺癌细胞株的生物学作用。 方法:(1)用Iodogen法将<'131>I标记到Herceptin,Sephadex G50柱纯化,纸层析法质量检测。(2)MTT比色法检测<'131>I-Herceptin对表达不同水平Her-2的三株乳腺癌细胞株SK-BR-3、MDA-MB-231、MCF-7的抑制作用;(3)流式细胞计数仪测量各干预组和对照组DNA倍体和凋亡率。 结果:(1)Herceptin的<'131>I标记率83.38%,放化纯94.53%(2)MTT法检测结果显示:<'131>I-Herceptin对SK-BR-3细胞的抑制作用明显强于对MDA-MB-231、MCF-7细胞的抑制作用(P<0.05),并且明显强于<'131>I组、Herceptin组以及<'131>I+Herceptin组(P<0.05)。(3)流式细胞分析表明:<'131>I-Herceptin组的凋亡率(37.71%)要明显高于<'131>I+Herceptin组(14.61%)(P<0.05),Herceptin组(3.37%)和<'131>I组(0.93%)(P<0.01),并且各干预组都出现细胞周期的阻滞,<'131>I-Herceptin最明显(73.19%)。 结论:(1)Iodogen法<'131>I标记Herceptin简单易行,标记效果可靠,标记率高(83.38%),对抗体的免疫活性影响小。 (2)人乳腺癌细胞株SK.BR-3高表达Her-2基因(99.30%)(3)<'131>I-Herceptin对人乳腺癌细胞SK-BR-3组有明显的抑制和杀伤作用。 第二部分:<'131>I-Hterceptin在乳腺癌动物模型中的显像研究 目的:(1)建立Her-2高表达的乳腺癌动物模型。(2)对所建动物模型进行SPECI’肿瘤原位显像。(3)了解小鼠体内<'131>I-Herceptin的生物分布并计算肿瘤与非肿瘤组织的放射性比值(T/NT)和每克组织的放射性计数占注射剂量放射性计数的百分比。 方法:(1)以对数生长期的SK-BR-3细胞皮下接种BALB/c-neu裸鼠建立动物模型。(2)于注射<'131>I-Herceptin后的2、4、8、12、24、48、96小时对荷溜小鼠模型进行SPECT连续显像。(3)测量小鼠注射后的4、12、24、48小时每克各组织每分钟的放射性计数(cpm/g),并计算T/NT。以及%ID/g。 结果:(1)SK-BR.3细胞皮下接种BALB/c-neu裸鼠后成榴率96%。(2)实验组在注射<'131>I-Herceptin 2小时后就可见肿瘤部位的显像,在24小时达到最清晰图像,与周围组织对比最明显,在96小时依然可看到肿瘤部位较清晰的图像;而注射<'131>I-mlgG的对照组,在开始4个小时可隐约看到肿瘤轮廓,随着时间推后,显像渐不清晰,96小时几乎看不到肿瘤轮廓。(3)实验组,T/NT值除了在肾脏未达到1外,在其余脏器均大于1,并且绝大多数大于3,在24小时肿瘤/肌肉的比值可达到14.87,在96小时仍然可见较大的T/NT值;在对照组,除了在骨骼和肌肉。T/NT值大于1外,在其余各脏器均未达到1,并且T/NT值未见大于2的。在实验组,24小时肿瘤部位每克组织放射性计数占注射剂量放射性计数的14.85%(14.8%ID/g),而对照组为2.05%ID/g(P<0.05)。 结论:(1)以SK—BR.3细胞皮下接种裸鼠成瘤率高(96%)。(2)用<'131>I-Herceptin对荷SK-BR-3移植裸鼠模型显像能够得到清晰的图像。(3)体内分布实验表明,<'131>I-Herceptin注射后能得到理想的T/NT值,在24小时达到最大。
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