番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）是一种以B型和Q型烟粉虱（Bemisia tabaci）为传播媒介的双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶毒属（Begomovirus）成员。由该病毒所引起的番茄黄化曲叶病（Tomato yellow leaf curl disease，TYLCD）严重暴发于亚热带和热带的大部分地区，并已成为威胁世界番茄生产的重要因素。我国于2006年首次报道TYLCV侵染上海露地栽培番茄，之后几年该病毒迅速蔓延至山东、浙江等省，并严重危害番茄生产。本研究的目的是明确侵染我国番茄的TYLCV的遗传多样性，以及建立TYLCV快速检测体系，并从基因水平寻找引起植株对TYLCV沉默的因子，同时完成对TYLCV分离物侵染性克隆的构建，为后期开展该病害的防控提供理论和技术依据。为此，我们于2012年间对我国10余省份番茄主产区采集了22份TYLCV侵染的番茄样品，并对其进行了病原分子鉴定和序列比对分析。利用双生病毒的通用引物PA/PB对22份样品进行PCR扩增，均能扩增得到500bp大小的特异片段，说明该10余省份的番茄主产区中均有双生病毒侵染。对扩增产物回收纯化，克隆测序，经序列比对，初步鉴定有19份为TYLCV所侵染，有3份为TYLCCNV所侵染。在依据测序结果重新设计特异性引物TY-F/TY-R，建立了特异性检测TYLCV的PCR检测体系，能够快速、高效的检测感病番茄样品。分别以鉴定为感染TYLCV的19份番茄植株总DNA为模板，采用背靠背引物Full-F/Full-R，扩增TYLCVDNA–A组分的全长序列，经克隆和序列测定，系统进化分析表明，该19个TYLCV分离物间具有97.0%～99.7%的相似性，与GenBank上已登入的其它各地区的TYLCV分离物也具有较高的相似性，并具有典型的Begomovirus病毒的基因结构特征，说明它们为TYLCV分离物。利用引物DB-F/DB-R进行双生病毒DNA-B组分的PCR检测，所有的这22份样品均不能扩增出DNA-B组分。当利用引物Dβ-F/Dβ-R对感病样品进行DNAβ检测，结果发现仅广西、四川的三份样品检测到DNAβ，且该三份番茄样品均被TYLCCNV所侵染，因此这种卫星DNAβ很可能是TYLCCNV在寄主植株上诱导的典型病害症状所必须的，并以TYLCCNV/DNAβ病害复合体的形式危害寄主植物。多序列比对发现，尽管TYLCV在全世界范围内普遍发生，但其分离物核苷酸序列间却具有较高的相似性，相比于Begomovirus其它病毒仍具有较低的变异率。通过对2008～2012年GenBank上登入的我国各地区的TYLCV分离物进行系统进化分析，其中侵染我国中东部省份及东南沿海地区的河北省、河南省、安徽省、山东省、江苏省、浙江省、上海等地区的主要为TYLCV，侵染我国西南部和西部的广西省、四川省、云南省、新疆等地番茄主产区的主要为TYLCCNV及其株系。发现TYLCV具有典型的季节流行动态，同时其在不同地区相同时间以及相同地区不同时间的发生也具有一定的规律性，这与TYLCV分离物的省内和省间遗传距离分析结果一致，即TYLCV在中国成面状分布，无明显的地域性，并成逐年流行趋势，其流行是由多个传播链引起的远程传播造成的。为了分析侵染番茄的TYLCV分离物的致病性，遂构建了TYLCV山东（SD-SG）分离物的侵染性克隆pBI121–SD–1.78A。农杆菌接种烟草、番茄和辣椒，该侵染性克隆在其原始寄主植株番茄上具有较好的致病性，在烟草上也表现出一定的致病性，而在辣椒上不具致病性。因此，本研究所构建的pBI121–SD–1.78A侵染性克隆具有侵染性。用该侵染性克隆对番茄抗TYLCV材料进行接种，发现课题组自备的三份抗性材料表现良好的抗性。同时通过农杆菌渗透法鉴定出TYLCV的沉默抑制子为V2，该基因抑制寄主植株对TYLCV的抗性，为进一步研究TYLCV的基因功能、病毒致病性、病害侵染循环和该病害的防控技术奠定了基础。