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肺癌是中国发病率及死亡率最高的恶性肿瘤,占整个肿瘤引起的死亡的1/3。约85%肺癌病理类型为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),其中70%非小细胞肺癌在确诊时已属晚期,难以通过手术或放化疗等治疗手段进行根治性治疗。另外,超过一半的早期患者尽管经过手术、放化疗等积极治疗后依然出现局部复发或远处转移等情况,因此深入研究肺癌的发病机制,对肺癌的诊断和治疗具有重要意义。 WDR79蛋白是WD重复蛋白家族的重要成员,是端粒酶的重要组成部分,对维持端粒酶的稳定进而保持基因组的完整性有着重要的作用。WDR79蛋白的WD重复结构域,使其具有作为平台介导蛋白质之间的相互作用的功能,在信号转导、蛋白运输、染色体修饰、RNA加工及转录等过程中担当重要的角色。研究表明WDR79蛋白在非小细胞肺癌组织和细胞系中高表达,能通过影响细胞周期和细胞凋亡促进非小细胞肺癌细胞增殖,但是其具体的分子机制至今仍然不清楚。 UHRF1蛋白属于UHRF蛋白家族,是一种与表观遗传学修饰密切相关的核蛋白。它既是 DNA甲基化所必须的半甲基化 DNA结合蛋白,也具有泛素连接酶功能。研究表明UHRF1蛋白在人类多种肿瘤组织中高表达,其中包括膀胱癌、宫颈癌、胰腺癌、鼻咽癌及非小细胞肺癌等等,参与肿瘤细胞的增殖和分化。 课题组前期研究发现WDR79蛋白能促进非小细胞肺癌细胞增殖,为了进一步明确WDR79促进NSCLC细胞增殖的分子机制,我们通过抗体筛选,发现在NSCLC细胞中过表达WDR79能够上调 UHRF1蛋白水平,而干扰 WDR79表达则能下调UHRF1。为了阐明WDR79调控UHRF1的机制,我们通过间接免疫荧光和免疫共沉淀的方法,发现 WDR79与 UHRF1共定位于 NSCLC细胞核并存在相互作用。为了揭示它们相互作用的功能结果,我们通过荧光定量 PCR,蛋白酶体阻断和新生蛋白合成抑制等实验,证实 WDR79在 NSCLC细胞内通过抑制 UHRF1的泛素化,延长UHRF1的半衰期,在蛋白水平上稳定UHRF1。考虑到UHRF1促进肿瘤增殖的能力,我们通过 MTT的方法,进一步证明了 WDR79通过调控 UHRF1促进 NSCLC细胞的增殖。本文通过上述研究,揭示了 WDR79通过稳定 UHRF1介导NSCLC细胞增殖的分子机制,明确了调控癌蛋白UHRF1的新分子,不仅为进一步阐明NSCLC恶性生物学行为奠定理论基础,也将为NSCLC的诊断和治疗提供新的靶标和切入点,因此具有重要的科学意义和临床应用价值。