论文部分内容阅读
吐纳麝香（Tonalide,AHTN）是一种人工合成麝香,在各种生物和非生物介质中广泛存在,易在生物体内积累,具有内分泌干扰效应。AHTN进入人体的主要途径为皮肤接触。细胞间隙连接通讯（Gap junction intercellular communication,GJIC）是普遍存在于相邻细胞间的直接通讯通道,GJIC功能受到抑制与癌症的发生与发展有密切联系。目前AHTN对人体皮肤细胞GJIC的影响尚未见报道。为探讨AHTN对皮肤细胞GJIC功能的影响及可能的分子机制,本论文选用人永生化角质形成细胞HaCaT为实验材料,通过体外（in vitro）暴露实验,检测环境相关浓度的AHTN对HaCaT细胞活性的影响;通过细胞划痕标记染料示踪技术（Scrape-loading and dye transfer,SLDT）,检测AHTN对GJIC功能的影响;通过对GJIC生物标志物及MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路的定量分析,探究AHTN调控HaCaT细胞GJIC功能的分子机制。细胞活性检测发现,10-8M AHTN暴露24 h和10-9M AHTN暴露48 h均可极显著促进HaCaT细胞增殖;10-6M AHTN暴露48 h可极显著抑制HaCaT细胞增殖。SLDT检测发现,10-8M AHTN暴露24 h,GJIC功能增强;10-8和10-9M AHTN暴露48 h,GJIC功能减弱。对不同暴露浓度和时间下雌激素受体α（Estrogen receptor,ERα）的定量分析及抑制剂实验证明,AHTN可以通过上调ERα的表达,促进或抑制下游Cx26、Cx43的表达,进而影响HaCaT细胞的GJIC功能。对MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路的定量分析发现,10-8和10-9M AHTN暴露可上调级联分子MEK、ERK、PI3K和AKT的磷酸化水平,激活两条信号通路,上调Cx43磷酸化的水平,抑制GJIC功能。本论文首次通过体外实验证明了环境相关浓度的AHTN对人体皮肤细胞GJIC的影响及可能的分子机制,为客观评价AHTN的生物毒性和致癌风险提供了科学依据。