论文部分内容阅读
MicroRNAs (miRNAs)是一类约22个碱基的小分子非编码RNA,它广泛存在于各种真核生物中,通常在转录后水平负调控基因的表达。在肝癌中,miRNAs在组织中表达经常失调,一些特定的miRNAs与肝癌的转移、复发和预后等临床病理特征相关。为了研究miRNAs对肝癌细胞运动以及转移的作用,本文利用活细胞工作站观察下的创伤修复实验筛选人类miRNAs库并通过transwell实验进行验证,通过筛选,我们发现了11个对肝癌细胞SK-Hep-1迁移有调控作用的miRNAs分子：miR-1247, miR-1244, miR-146b-3p, miR-1471, miR-188-3p, miR-661, miR-891a, miR-891b, miR-767-5p, miR-525-3p和miR-134。进一步的研究发现miR-134在肝癌中表达下调且其表达水平与淋巴结侵袭和血管侵犯存在负相关。与此同时,过表达miR-134能抑制肝癌细胞体外和体内的侵袭与转移；抑制内源性的miR-134可以促进肝癌细胞的迁移和侵袭能力。通过生物信息学及基因芯片技术的方法,结合荧光素酶实验,我们确定了Integrin Beta 1 (ITGB1)是miR-134的一个直接靶基因,过表达ITGB1可以显著促进肝癌细胞的迁移与侵袭,且ITGB1可以回复miR-134对肝癌细胞迁移和侵袭的抑制作用。同时,我们通过TCGA数据库检测了miR-134以及ITGB1在不同肿瘤中的表达情况。结果显示,在肝细胞肝癌,透明细胞性肾细胞癌以及甲状腺癌样本中,miR-134表达下调,而ITGB1表达上调。在乳头状肾细胞癌中,miR-134表达下调,ITGB1的mRNA表达水平无变化。而在头颈部鳞状细胞癌中,ITGB 1表达上调,miR-134表达水平无明显变化。同时在头颈部鳞状细胞癌中,ITGB1的高表达与其总生存期负相关。通过对细胞形态变化的观察,我们发现miR-134能够显著抑制细胞应力纤维的形成,并降低肝癌细胞与基质的粘附能力。Western Blot实验表明miR-134的抑制作用与其降低ITGB1下游FAK的磷酸化水平以及RhoA的激活有关,ITGB1基因的过表达可以回复miR-134引起的FAK磷酸化水平下调以及RhoA的活性降低,这些结果表明miR-134能够抑制ITGB1的信号通路的激活,导致肝癌细胞迁移和侵袭能力的下降。综上所述,我们通过筛选发现miR-134能够抑制肝癌细胞的迁移、侵袭与转移,ITGB1是受到miR-134直接调控的功能性靶基因。通过肝癌转移相关miRNAs的研究,将有助于加深我们对肝癌细胞侵袭与转移的理解,并有望为肝癌的治疗提供全新的候选靶点。