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杆状病毒是双链DNA病毒的一个大家族，该病毒主要感染鳞翅目、双翅目、膜翅目昆虫及甲壳类动物，区别于其它病毒的显著性特征是它具有双相复制周期，其生活周期中产生两种结构与功能不同的病毒粒子：出芽病毒（BV）和包涵体病毒（ODV）。家蚕核型多角体病毒(BmNPV)是昆虫杆状病毒科核多角体病毒属的代表成员，虽然关于其感染的机制进行了大量研究，但仍有许多问题需要进一步解决，本论文主要对GP64及胆固醇介导BmNPV BV入侵细胞机制及GP64信号肽特性作了进一步的研究，以揭示膜融合蛋白 GP64胆固醇识别序列(CRAC)与胆固醇的相互作用是BV入侵细胞的关键，同时也证明了GP64信号肽在引导GP64跨膜转运后并没有发生切割。本研究丰富了杆状病毒感染分子机制的理论。 本论文主要从以下几个方面研究GP64与胆固醇介导BmNPV BV入侵细胞的分子机制：BmNPV GP64序列分析及信号肽特性分析、BmNPVgp64缺失病毒的构建、BmNPV GP64CRACs分析及与胆固醇互作探究。这些研究结果为后期阐述BmNPV入侵细胞机制提供参考。 1）BmNPV GP64序列分析及信号肽特性分析：BmNPVgp64全长1593 bp，编码530个氨基酸，其N端信号肽序列为38个氨基酸残基。通过序列比对发现 BmNPV GP64与AcMNPV GP64的同源性达到93％；在BmNPV GP64信号肽内部加上c-Myc-Tag，再转染BmN细胞，通过western blot验证BmNPV GP64信号肽在完成跨膜转运后是否被切割。 2）BmNPV gp64缺失病毒的构建：利用同源重组的方法将打靶DNA分子通过电击转化到Red重组系统中，通过两种抗性筛选阳性克隆。设计鉴定引物及缺失基因内部引物进行PCR鉴定，将鉴定正确的缺失病毒重新构建新的Bac-to-Bac系统。该成果将为后续研究奠定基础。 3）BmNPV GP64 CRACs分析及与胆固醇互作探究：通过序列比对发现，AcMNPV GP64含有3个CRACs，而BmNPV GP64含有4个CRACs，其中一个CRAC正好在BmNPV GP64的信号肽内；为了研究BmNPV GP64哪个CRAC与胆固醇具有结合活性，我们设计了一系列重组病毒Bacmid，通过转染进行感染性验证。 通过上述研究，我们成功构建了 BmNPV gp64缺失病毒，首次揭示了 BmNPV GP64信号肽序列在蛋白质后期加工中并没有被切割，为进一步研究BmNPV入侵细胞机制提供了新的参考。