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目的:研究新生大鼠脑缺氧缺血后HAX-1和Omi/HtrA2在脑顶叶皮质神经元细胞胞质中的动态变化,进而探讨Omi/HtrA2和HAX-1在新生大鼠HIBD中的作用及参附注射液(SFI)的干预作用。
方法:参照Rice法和陈惠金法制备新生大鼠HIBD模型,将新生7日龄SD大鼠随机分为假手术组(S)、生理盐水对照组(C)、参附治疗组(SF),每组按术后观察时间点不同进一步分为6h、12h、24h、72h四个亚组,每个亚组8只大鼠。处死时观察每只新生大鼠脑组织的大体形态;采用HE染色,观察假手术组和缺氧缺血组新生大鼠72h脑皮质组织的病理变化;采用免疫组化和Western Blotting法检测各组病变侧脑组织HAX-1和Omi/HtrA2蛋白的表达变化。
结果:(1)脑大体检查:新生大鼠HIBD后C组结扎侧半球脑组织受损严重,在24h时苍白、水肿明显,体积明显大于对侧,SF组大鼠未见上述改变或仅见结扎侧脑半球轻微的水肿;S组大鼠大脑半球左右对称,未见任何病理变化。(2)脑组织病理变化:72h可见缺氧缺血组新生大鼠右侧脑组织细胞排列紊乱,呈网状或索条状,神经细胞肿胀,局灶性细胞核固缩。(3)Western Blot结果示:C组和SF组Omi/HtrA2(6h、12h、24h、72h)、HAX-1(6h、12h)表达水平均较S组升高,其差别有统计学意义(P<0.01);C组Omi/HtrA2在HI后6h开始表达,24h达到高峰,随后开始下降;C组HAX-1在HI后6h即开始增加,随后开始下降,72h仍高于S组。SF组Omi/HtrA2表达水平在12h、24h、72h较C组降低,其差别均有统计学意义(P<0.01);SF组HAX-1表达水平在12h,24h较C组增多,其差别有统计学意义(P<0.05)。(4)免疫组化结果示:C组病变侧大脑皮层胞浆和胞膜中,Omi/HtrA2阳性细胞数在HI后24h达到高峰,以后降低;HAX-1阳性细胞数在HI后6h即有高表达,随后下降,与S组差别有统计学意义(P<0.01)。
结论:HIBD后大鼠病变侧大脑皮层Omi/HtrA2和HAX-1的表达水平明显升高,参附注射液(SFI)能下调Omi/HtrA2的表达和上调HAX-1的表达,具有保护作用。