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目的:原发性肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是恶性程度极高的肿瘤,肝癌在早期不易发现、病程进展迅速、预后极差,尽管采取积极手术治疗,绝大多数病人仍难免死于肿瘤转移及复发。为了可以更早的发现疾病并找到有效的治疗方法,明确肝癌的发病机理就显得尤其重要。离子通道蛋白在肿瘤的发生发展中占有关键性的作用,与肝癌发生之间的密切关系也有了越来越多的研究。SLC26A6是新近发现的阴离子通道蛋白,通过TCGA数据库发现,在正常人的肝脏中低表达,而高表达于原发性肝癌患者,且二者的生存曲线具有统计学差异。基于SLC26A6在人正常肝脏中的低表达,推测SLC26A6的上调可能导致肝癌的发生发展。在国内外的研究中尚未报道SLC26A6与肿瘤的关系。本课题旨在探索SLC26A6在原发性肝癌发生发展中的作用及可能的分子机制,希望可以为原发性肝癌的发病机理及防治提供更多的理论依据。方法:1.通过免疫组织化学技术检测SLC26A6在人正常肝脏和原发性肝癌组织中的表达;2.运用q RT-PCR技术检测SLC26A6的m RNA在人正常肝细胞株QSG-7701和人肝癌细胞株SK-Hep1、Hep G2、LM3、MHCC-97H、Huh7中的表达;3.运用慢病毒感染QSG-7701人正常肝细胞和SK-Hep1人肝癌细胞株过表达SLC26A6以及人正常肝细胞QSG-7701和人肝癌细胞株Huh7沉默SLC26A6;通过q RT-PCR分别验证QSG-7701、SK-Hep1和Huh7细胞过表达和沉默SLC26A6是否成功;4.运用CCK-8及Edu细胞增殖实验、生长曲线分别检测SLC26A6过表达/沉默后,对QSG-7701人正常肝细胞、SK-Hep1人肝癌细胞株和Huh7人肝癌细胞株的空白对照组、空转组以及过表达组/沉默组增殖能力的影响;5.运用平板集落实验分别检测SLC26A6过表达/沉默后,对正常肝细胞QSG-7701和Huh7肝癌细胞的空白对照组、空转组以及过表达/沉默组集落形成能力的影响;6.运用裸鼠皮下成瘤实验检测人正常肝细胞QSG-7701过表达SLC26A6后,空转组与过表达组的成瘤情况。7.运用流式细胞周期实验技术检测SLC26A6过表达/沉默后,对QSG-7701、SK-HEP1和Huh7细胞的空白对照组、空转组以及过表达/沉默组周期的影响;8.运用流式双染法(Annexin V-FITC/PI)检测人肝癌细胞株Huh7沉默SLC26A6后,对细胞空白对照组、空转组以及沉默组早期凋亡和晚期凋亡的影响。结果:1.免疫组化结果显示:SLC26A6在人正常肝脏中表达显著低于原发性肝癌组织(P<0.001),在不同分化程度的肝癌组织(低分化、中分化和高分化肝癌)中,SLC26A6的表达均明显高于肝癌的癌旁组织(P<0.001),SLC26A6在分化程度越差的肝癌组织里表达越高,与肝癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、血清AFP、血管侵犯情况及有无乙肝病毒感染无显著相关性;2.q RT-PCR结果显示:SLC26A6在人正常肝细胞QSG-7701和人肝癌细胞SK-Hep1、Hep G2、LM3、MHCC-97H、Huh7中均有表达,SLC26A6在人肝癌细胞Hep G2中表达最高,其次是肝癌细胞株Huh7,在肝癌细胞SK-Hep1中表达最低;3.q RT-PCR结果显示:人正常肝细胞QSG-7701和肝癌细胞SK-Hep1的过表达组分别与空转组相比,SLC26A6过表达组的SLC26A6m RNA水平明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);正常肝细胞QSG-7701和肝癌细胞Huh7的沉默组分别与空转组相比,SLC26A6沉默组中SLC26A6m RNA水平明显下调,差异具有统计学意义(P<0.01);4.CCK-8结果显示:肝细胞QSG-7701和肝癌细胞SK-Hep1的过表达组分别与空转组相比,SLC26A6过表达组的细胞增殖明显增多,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.001);正常肝细胞QSG-7701和肝癌细胞Huh7的沉默组分别与空转组相比,SLC26A6沉默组的细胞增殖明显减少,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.001);5.生长曲线实验结果发现:正常肝细胞QSG-7701和肝癌细胞SK-Hep1的过表达组分别与空转组相比,过表达组细胞的生长明显增快,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.001);正常肝细胞QSG-7701和肝癌细胞Huh7的沉默组分别与空转组相比,沉默组细胞的生长明显减慢,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);6.实验结果显示:正常肝细胞QSG-7701和肝癌细胞SK-Hep1的过表达组分别与空转组相比,过表达组细胞在S期的DNA合成明显增多,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);正常肝细胞QSG-7701和肝癌细胞Huh7的沉默组分别与空转组相比,沉默组细胞在S期的DNA合成明显减少,差异具有统计学意义(P<0.001);7.平板集落形成实验结果显示:正常肝细胞QSG-7701过表达组与空转组相比,过表达组细胞的集落数目及面积明显提高,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);正常肝细胞QSG-7701和肝癌细胞Huh7的沉默组分别与空转组相比,沉默组细胞的集落数目及面积明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.001);8.裸鼠皮下成瘤实验结果显示:人正常肝细胞QSG-7701过表达SLC26A6后,对成瘤组织进行HE染色,发现致密结构;注射过表达组细胞一侧的前后成瘤情况在重量和体积上均存在显著差异(P<0.05);9.流式细胞周期实验结果发现:QSG-7701和SK-Hep1细胞的过表达组分别与空转组相比,QSG-7701细胞过表达SLC26A6后分布于G0/G1期和G2/M期的细胞比例减少(P<0.05)且S期细胞比例明显增加(P<0.001);SK-Hep1细胞过表达SLC26A6后细胞周期被阻滞在G0/G1期且分布于S期和G2/M期的细胞比例明显减少(P<0.05);QSG-7701和Huh7细胞的沉默组分别与空转组相比,QSG-7701细胞沉默SLC26A6后分布于G0/G1期的细胞比例明显减少,G2/M期和S期比例显著增多(P<0.01);Huh7细胞沉默SLC26A6后,细胞周期被明显的阻滞在G0/G1期,分布于S期的细胞比例显著降低(P<0.001);10.流式双染法(Annexin V-FITC/PI)结果显示:人肝癌细胞株Huh7沉默组与空转组相比,沉默组可以明显地诱导肝癌细胞Huh7的早期和晚期凋亡,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:SLC26A6上调促进了正常肝细胞的恶性转化及肝癌细胞的增殖。SLC26A6下调抑制正常肝细胞及肝癌细胞的增殖,促进肝癌细胞的凋亡。SLC26A6可能是一种新的促癌基因。