仙茅是我国一味使用了千年的中药,主要治疗阳痿、筋骨萎软、腰膝冷痹、阳虚冷泻等症状,是非常宝贵的中药材。野生仙茅因人为和牲畜的破坏,导致数量急剧减少;但其作为中药材和保健品原料,市场需求却越来越大,野生仙茅数量已经无法满足人们的需要;目前人工方法栽培仙茅已经表现出极大的现实经济价值。传统培育仙茅的方式工作量大,成活率低,且浪费了大量优质仙茅。本论文研究了仙茅更高效、便捷的繁育方式,利用植物组织培养育苗和人工种子技术育苗,在一定程度上解决了仙茅产量不足的问题,具有较大的现实意义。本论文来源于国家林业公益性行业科研专项项目《仙茅、鸡血藤资源培育及林下种植技术研究》,项目编号201304807。目前市场上仙茅的品种很多,本研究基于的是栽培于广州从化的四川宜宾野生仙茅。通过设置单因素试验、正交试验等探究了快速得到仙茅植株的三条途径。以仙茅幼叶诱导愈伤组织得到完整植株;由不定芽制作人工种子得到完整植株;利用仙茅的细胞悬浮培养,诱导出胚状体制作人工种子,以得到完整植株。实验结果证明三种方式均具有可行性:正交试验和单因素试验结果表明,MS基本培养基中加入0.1mg/L的2,4-D、1.5mg/L的KT,3%的多菌灵和8mg/L的柠檬酸,诱导出的仙茅愈伤组织效果最好,可达96%。方差分析得知2,4-D、KT、多菌灵的浓度对仙茅出愈率的影响差异极显著,6-BA浓度和NAA浓度对出愈率影响差异极显著。继代培养基为MS加入0.3mg/L的NAA,2mg/L的6-BA,0.3mg/L的2,4-D,继代效果最好,增殖率最高,愈伤组织的质量最好,较易诱导出不定芽。在培养基中添加0.3mg/L的NAA有利于生根,移栽至营养土中的成活率可达到90%以上。在人工胚乳中加入0.05 mg/L6-BA,0.8mg/L NAA制作的人工种子萌发率可达到93%,添加3mg/L多菌灵时人工种子的染菌率最低。对比试验表明包两层膜的人工种子比包一层膜的人工种子,保水性和机械性都更好。当海藻酸钠浓度为3%时,制作的人工种子质量最好,大小相同,软硬合适。以2%的CaCl2为固化剂,反应两次,第一次固化5分钟,第二次固化10分钟,制成的人工种子形态状况最好,颗粒均匀,软硬适中,呈球形,透明有弹性。愈伤组织继代时,培养基蔗糖浓度为15g/L,6-BA浓度为2mg/L、NAA浓度为0.5mg/L时,可得到疏松易碎适合做悬浮细胞的愈伤组织。正交试验探究非激素水平对细胞悬浮培养影响结果表明:蔗糖影响悬浮细胞形态,MES对悬浮培养液的PH值影响较大,对数据进行方差分析得知,不同浓度的蔗糖、水解酪蛋白、MES、脯氨酸对仙茅细胞悬浮培养影响的差异极显著。探究激素对细胞悬浮培养的影响时发现,2,4-D影响悬浮细胞结构,当2,4-D浓度为0.5mg/L时,胚性细胞数量达到最大值。细胞的生长随着培养时间的变化呈现“S”形曲线,接种量对悬浮培养的影响最大,接种量为15%是仙茅细胞悬浮培养的最适接种量。本论文以组织培养育苗,替代传统的根茎繁殖,成功建立了仙茅组织培养繁殖体系,可将其应用于仙茅的大规模生产,解决目前仙茅市场紧缺的状况。并且以此为基础,利用仙茅不定芽,成功研制出仙茅双层膜人工种子,在一定程度上解决了传统人工种子抗压能力弱和保水性能差的问题。成功建立仙茅植物细胞悬浮体系,为今后在细胞水平上研究仙茅奠定理论基础。