背景和目的大肠癌是人类常见的消化道恶性肿瘤之一，在我国其发病率有逐年上升的趋势。早期发现、早期诊断、早期治疗是提高大肠癌患者生存率的关键，而对高危人群进行普查则是大肠癌早期发现的重要手段。目前较常用的大肠癌普查手段主要有：粪便隐血试验(化学法或免疫法)、纤维乙状结肠镜检查、X线肠气钡双重造影检查及全结肠镜检查，各种方案均有其自身的优缺点。现在越来越多的人意识到疾病筛查的重要性，各国也依据国情制定了自己的筛查方案，其中粪便隐血试验是目前普查最常用的方法，被美国胃肠病学会推荐用于普通人群大肠癌的筛检。但近年来学者也开始寻找新的筛查技术，其中粪便脱落细胞的检测由于无创无痛且特异性较高日益受到重视，但粪便中的细胞提取率并不十分理想，且操作过程稍显繁琐，难于推广应用。本文系统论证了粪便脱落细胞提取方法的严谨性、可行性及其临床意义，并在原有的脱落细胞提取方法上进行了一些改进，希望能够增加这项技术的临床实用性，能够早日大规模地应用于临床工作。材料和方法一、对肠道细胞液基保存液作用的评价及其意义共入组8例大肠癌患者，收集每例患者的自然便，分为3份，进行不同的预处理，用相同的粪便脱落细胞提取方法、HE染色及显微镜观察。二、对肠道脱落细胞提取方法学的进一步验证10例经过病理证实的大肠癌患者，收集每例患者的自然便、冲洗便以及将两种标本混合后的混合便，提取脱落细胞，HE染色及光镜下观察。三、新鲜固体便的不同部位的脱落细胞提取结果的分析10例确诊的大肠癌患者，每例患者在其自然便的内部及外部分别取便，提取脱落细胞，HE染色及光镜下观察。四、不同次第的清肠便中脱落细胞的提取及其意义来消化内镜中心进行消化内镜检查的17例患者，口服清肠药约3000ml后，分别收集每例患者的第2次、第3次、第4次及第5次清肠便，提取脱落细胞，HE染色及光镜下观察。五、食管癌与胃癌患者的粪便脱落细胞提取及其意义22例食管癌与胃癌患者，收集每例患者的自然便，提取脱落细胞，HE染色及光镜下观察。六、大肠癌患者的粪便脱落细胞检查及其意义41例经病理证实的大肠癌患者、34例大肠腺瘤患者及20例健康对照者，收集每例患者的自然便及清肠便，提取脱落细胞，HE染色及光镜下观察；并对每例患者进行免疫法粪便隐血试验。结果1、对肠道细胞液基保存液作用的评价及其意义在8例自然便经过处理的患者中，有4例患者的新鲜便中检出恶性细胞，4例中相应的陈旧液基液保存便中也检出恶性细胞，而陈旧未保存便中则未检出任何细胞成分。2、对肠道脱落细胞提取方法学的进一步验证结果10例大肠癌患者中，每例患者的混合便与冲洗便的脱落细胞提取结果一致。3、新鲜固体便的不同部位的脱落细胞提取结果的分析10例患者中，固体便内部的恶性细胞检测率为40.00％(4／10)；固体便外部可查见恶性脱落细胞的有5例，恶性细胞检测率为50.00％(5／10)，两者差异无统计学意义(X~2=0.202，P=0.653＞0.05)。4、不同次第的清肠便中脱落细胞提取结果涂片结果为A级的细胞涂片在第2次、第3次、第4次及第5次清肠便中所占比例分别为12.5％(2／16)、5.88％(1／17)、56.25％(9／16)、40.00％(6／15)。5、食管癌与胃癌患者的粪便脱落细胞提取结果22例食管癌与胃癌患者中，无一例患者粪便中找到恶性脱落细胞。6、大肠癌患者的粪便脱落细胞检查结果6．1 41例大肠癌患者一次取便与二次取便的细胞学检查结果对比：一次自然便脱落细胞学检查对大肠癌的敏感性为46.34％(19／41)，一次清肠便的敏感性为36.59％(15／41)，二者差异无统计学意义；连续两次粪便(自然便及清肠便各一次)检查结果敏感性为68.29％(28／41)，连续两次检查敏感性高于一次取便。6．2 41例大肠癌患者的分化程度、分期与脱落细胞学检查结果：高分化腺癌16例，中分化13例，低分化6例，分化不详6例；Dukes分期：A期4例，B期18例，C期11例，D期3例，分期不详5例。共有28例患者的粪便中检出恶性细胞，恶性细胞检出率为68.29％(28／41)；脱落细胞学检查结果在不同的分化与分期的大肠癌患者中差异无统计学意义。6．3大肠癌患者免疫粪便隐血试验的阳性率为75.61％(31／41)，与脱落细胞学阳性率相比差异无统计学意义，但粪便脱落细胞特异性高于隐血试验(100％与85.18％)(X~2=8.6400，P＜0.05)。两法互补后，对大肠癌的检测敏感性可达92.68％(38／41)，与单一的脱落细胞检测法及单一的粪隐血试验敏感性相比差异均有统计学意义(X~2=4.479，P＜0.05与X~2=7.765，P＜0.05)。6．4 34例大肠腺瘤患者中有25例粪便中检出炎症细胞或正常的腺上皮细胞(73.53％)，20例健康者中14例粪便中检出炎症细胞或正常的腺上皮细胞(70.00％)。6．5粪便中脱落的癌细胞主要有以下形态变化：核大，核深染(有些细胞核深如墨)，核浆比例失调，细胞大小不一，且腺癌细胞常成团脱落。结论1、本实验在粪便脱落细胞的提取过程中主要有两方面改进：使用了肠道细胞液基保存液，其可较好地保存并固定脱落细胞的形态，并可祛除粪便标本中的粘液；使用了自动细胞制片机，提高了制片质量。改进后的方法更加简便有效。2、通过对脱落细胞提取过程中的各个相关部分的实验设计及论证，使此法更加严谨，实用，便于临床推广。将其与粪隐血试验互补后大大提高了大肠癌的检出率，有望成为新的大肠癌筛检方法。