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口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的偶蹄动物传染病，严重危害家畜的生产力和畜产品质量，给畜牧业和进出口贸易造成较大的经济损失，直接威胁着国际贸易和国家声誉及人类食品卫生，因而受到人们的普遍关注。口蹄疫病毒衣壳由4种结构蛋白VP1-4各60个拷贝组成，VP1蛋白又称1D蛋白，其基因位于基因组的2977-3615，编码213个氨基酸。早期研究表明，结构蛋白VP1暴露在病毒颗粒的表面，是诱导产生中和抗体的主要成分。 本试验以保存的pGEM-VP1质粒为模板，用特异性表达引物PCR扩增得到口蹄疫病毒（FMDV）VP1目的基因（639bp），对目的基因和穿梭表达载体pTriEx分别以相同的限制性酶NcolⅠ和XholⅠ消化后，经连接酶连接构建成重组表达载体，转化宿主菌BL21（DE3）pLySs后得到重组质粒pTriEx—VP1，通过酶切及PCR扩增鉴定筛选出阳性克隆，测序证明目的基因正确插入到表达载体。随后用IPTG诱导VP1基因的表达，收集不同时间的菌液进行SDS—PAGE电泳、Western-blotting分析检测，结果表明结构蛋白VP1基因在大肠杆菌中能高效表达，表达量占菌体蛋白总量的26％以上，表达的目的蛋白的分子量约为26kD。该表达产物为融合蛋白，能被口蹄疫阳性血清所识别。进一步的试验证明表达产物为可溶性的蛋白，此蛋白不需要进行变性、复性的纯化处理，用ProBondTM Column进行亲和层析得到初步纯化的VP1蛋白，经ELISA检测此蛋白有活性。将穿梭重组质粒pTriEx—VP1转染BHK21细胞，通过双抗体夹心ELISA方法和间接免疫荧光标记方法，检测细胞中表达的口蹄疫病毒抗原。结果表明，重组质粒pTriEx—VP1能在BHK21细胞中表达，但表达量较低。本试验为进一步研究VP1的晶体结构、建立口蹄疫的诊断方法提供了材料。