天牛是鞘翅目昆虫中一个很大的类群,其幼虫大多以木质纤维为食。因为天牛危害,林木受害率达20-90%,每年经济损失上亿元。而传统的天牛防治方法费时、费工、成本又高,有的还对环境有严重污染。因此,探索新的防治途径,开发新的防治技术,已成为生产上的迫切要求。新的害虫防治方法和理论完善与发展离不开昆虫生理生化的研究。近年来,研究昆虫肠道正常菌群和肠道微生态以探索新的害虫控制方法正在成为国内外研究的热点之一。本文用传统培养方法和现代分子生物学方法-16S rRNA分析法对桑粒肩天牛幼虫肠道微生物组成进行了研究。同时本文还构建了含有GFP 标记基因的Cry3A基因重组质粒载体,并将此载体转入桑粒肩天牛幼虫肠道优势菌群,以期通过GFP标记基因表达绿色荧光蛋白而研究优势菌群在桑粒肩天牛幼虫肠道内的定植以及Cry3A 基因在桑粒肩天牛幼虫肠道内的表达。进而研究Cry3A 表达的毒蛋白对天牛生长发育的影响,为新型转基因生物农药的研发提供理论依据与技术支撑。主要研究结果如下: (1) 用传统的培养方法共分离出28 种细菌,经鉴定为9 个不同的属,由分离率和肠道菌群的数量统计可得天牛肠道优势菌群是葡萄球菌属(Staphylococcus),其菌量为7.84±0.61,分离率为100%;其次是肠杆菌属(Enterobacter),其菌量为7.42±0.23,分离率也为100%。其它细菌分离率较低,依次是克雷伯氏菌属(Klebsiella)、链球菌属(Streptococcus)、变形杆菌属(Proteus)、沙雷氏菌属(Serratia)、埃希氏菌属(Escherichia)、芽孢杆菌属(Bacillus)、微球菌属(Micrococcus)。(2) 将传统方法从桑粒肩天牛幼虫肠道分离、鉴定的9 个不同属的细菌作为PCR 模板,进行16S rRNA 序列分析。研究结果表明这9 个不同属的细菌分别是葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠杆菌属(Enterobacter)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、链球菌属(Streptococcus)、变形杆菌属(Proteus)、沙雷氏菌属(Serratia)、埃希氏菌属(Escherichia)、芽孢杆菌属(Bacillus)和微球菌属(Micrococcus),与分离培养方法所获得的结果一致。所测序列与BLAST 中的16S rRNA 序列相似性分别为98.78%、99.02%、98.86%、97.89%、99.24%、98.99%、98.44%、86.67%、99.18%(第一对引物);99.23%、99.34%、99.64%、98.35%、99.87%、99.08%、99.16%、99.32%、99.29%(第二对引物)。(3) 用16S rRNA 序列分析法研究结果表明桑粒肩天牛幼虫肠道微生物优势菌群为葡萄球菌属(Staphylococcus),其次为肠杆菌属(Enterobacter)。它们的16S