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第一部分妇科恶性肿瘤细胞系RASSF1A基因表达及其启动子区域DNA甲基化检测目的:研究妇科恶性肿瘤细胞系Ras相关结构域家族1A(Ras-association Domain Family 1A Gene,RASSF1A)基因启动子区域DNA甲基化水平及RASSF1A基因表达;探讨妇科恶性肿瘤细胞系RASSF1A基因甲基化与其表达的关系。方法:选取9株妇科肿瘤系A2780、Anglne、Caov3、COC1、SKOV3、HEC-1B、Ihsikawa、Hela、Siha为研究对象,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术及甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation-specific PCR, MSP)技术检测这9株妇科恶性肿瘤细胞系中RASSF1A基因mRNA表达水平及其启动子区域的DNA甲基化状态。结果:在A2780、Anglne、Caov3、SKOV3、HEC-1B和Ishikawa细胞系中RASSF1A基因启动子区域存在DNA超甲基化,在COC1、Hela和Siha中RASSF1A启动子区域存在DNA部分甲基化。同时检测到A2780、Anglne、Caov3、SKOV3、HEC-1B和Ishikawa细胞系中RASSF1A表达水平极低,而COC1、Hela和Siha中RASSF1A表达水平较高。结论:妇科肿瘤细胞系中普遍存在RASSF1A基因甲基化,RASSF1A基因启动子区域DNA高甲基化是抑制其表达的机制之一。第二部分5-杂氮-2’-脱氧胞苷对卵巢癌SKOV3细胞系RASSF1A基因甲基化及其表达的影响目的:探讨去甲基化试剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-2aza-CdR)对卵巢癌细胞系SKOV3中RASSF1A基因的甲基化及表达的影响和对SKOV3细胞的增殖活性和侵袭能力的影响。方法:用MSP、RT-PCR分别检测5-2aza-CdR对SKOV3细胞系干预前后细胞系RASSF1A基因甲基化状态及mRNA转录情况。用四唑盐比色法(MTT法)检测处理前后SKOV3细胞系的增殖活性, Transwell侵袭实验用来观察5-2aza-CdR对SKOV3细胞系侵袭能力的影响。结果:1.经5-2aza-CdR去甲基化处理后,SKOV3细胞系的RASSF1A基因启动子区域DNA未甲基化水平上升,甲基化水平降低;5-2aza-CdR处理后其mRNA转录水平较未处理者升高。2. 5-2aza-CdR对SKOV3细胞系的增殖活性和侵袭能力有明显的抑制作用,且随着药物浓度的增加其抑制作用也增强。结论:特异性甲基化转移酶5-2aza-CdR可逆转RASSF1A基因的DNA高甲基化,恢复其表达,并抑制肿瘤细胞生长和侵袭。