流感的爆发给社会的经济发展带来重大损失的同时给人们的生命安全造成严重的威胁。现阶段接种流感疫苗是预防流感的最有效手段。目前流感疫苗生产工艺以鸡胚培养工艺为主,该生产工艺存在种种缺陷,无法应对可能的流感大规模爆发的威胁。随着动物细胞培养技术的发展,基于动物细胞培养的流感疫苗生产工艺以其安全性、高产能等优势,逐渐成为替代鸡胚培养工艺的不二选择。然而将鸡胚培养工艺升级成动物细胞培养工艺过程中,原先接毒使用的毒种可能对动物细胞的感染力不足造成病毒产量不高。另一方面相较于鸡胚培养工艺,在利用动物细胞培养生产流感病毒过程中有更多关键的操作及控制参数,需要对其进行优化。本文以H5N1禽流感病毒、病毒培养环境和感染时的接毒条件为研究对象。首先通过驯化鸡胚源毒种获得对宿主细胞具有强感染力的病毒。结果发现在感染复数为0.0001、TPCK-胰酶浓度为5 mg/L的感染条件下,在悬浮细胞体系中经过驯化后病毒的组织半数感染剂量提高到了(7.50±0.25)lg TCID50/0.1 ml。进一步考察了培养液的pH对病毒血凝滴度的影响,以及接毒时的细胞密度和TPCK-胰酶对MDCK细胞生长及病毒产量的影响。结果发现在接毒后通过每12h流加1.33 ml/L的NaOH标准溶液使培养液pH保持在(7.2±0.2)时,病毒产量较未进行pH调节情况下提高了 68.2%;当接毒时的细胞密度为7.0× 106 cells/ml,并采用感染复数为0.0001、TPCK-胰酶浓度为14mg/L的感染条件时,收获的病毒血凝滴度为211.5±0.25 HA units/25 μl。最后将得到的最优工艺条件在7升生物反应器上进行工艺验证,获得的单位细胞病毒产量达到了(2.12±0.44)×104 virions/cell。将收获的病毒制成灭活疫苗进行动物实验,免疫21天后的血凝抑制抗体水平达到了26.80±0.50 HI units/25 μl。本文通过研究完成了基于MDCK悬浮细胞培养的H5N1禽流感病毒疫苗生产工艺的开发,为禽流感疫苗的高效大规模工业化生产提供了基础数据。