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精原干细胞(spermatogonialstemcells，SSCs)是指位于睾丸生精小管基膜上既能自我更新维持自身群体数量恒定，又能定向分化形成精母细胞，最终形成精子的一类原始干细胞。由于其在转基因动物生产及治疗不育症等方面有着诱人的前景，已经成为干细胞研究领域的一个热点。本研究以出壳6d的鸡SSCs为实验材料，研究了不同培养基在有、无饲养层情况下对SSCs外培养的影响。同时对SSCs在体外培养条件下的生物学特性进行了研究并进行了继代培养。初步探索了不同细胞因子：鼠白血病抑制因子(Mouseleukemiainhibitoryfactor，mLIF)、人干细胞生长因子(Humanstemcellfactor，hSCF)、碱性成纤维生长因子bFGF(Fibroblastgrowthfactor-basic，bFGF)的不同浓度组合对精原干细胞体外增殖和分化的影响。以期能建立适宜鸡SSCs体外长期存活的培养体系并为细胞的发育和分化提供细胞模型，为SSCs的建系奠定基础。研究结果总结如下几点：
1.采用Percoll密度梯度离心法分离鸡SSCs，分别在六种培养体系中进行培养，观察其生长特性及克隆形成率，结果表明：SSCs在无饲养层的培养体系Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ中虽能生长但存活时间较短且无法形成克隆。在有饲养层的培养体系Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ存活时间较长并能形成克隆，克隆形成率分别为31％、26％和10％，差异极显著(P＜0.01)。
2.SSCs分离提纯后，在以DMEM为基础培养液，在添加10％的胎牛血清、2％的鸡血清、2mmol/LL-谷氨酰胺、1mmol/L丙酮酸钠、5.5×10-5mol/Lβ-巯基乙醇、15ng/mLhSCF、10/mLmLIF、15ng/mLbFGF、100U/mL硫酸庆大霉素、以鸡胚成纤维细胞作饲养层的培养体系中培养，SSCs贴壁良好，并聚集增殖，形成典型的鸟巢状克隆。共传了3代，AKP染色阳性克隆率分别是31％、20％和18％，差异极显著(P＜0.01)。对传到三代的SSCs克隆进行AKP活性检测及SSEA-1免疫组化染色，均表现为阳性，表明在这种培养体系中，培养至第3代的SSCs仍保持干细胞未分化特性。
3.采用MTT法分别检测mLIF、bFGF和SCF三种细胞因子在单独添加和联合使用时对体外培养条件下的SSCs增殖的影响。实验结果表明；三种细胞因子在单独添加时，各实验组增殖效应与对照组比较差异显著(P＜0.05)。三种因子联合使用时，低剂量时共同促进SSCs的增殖，高剂量时则抑制SSCs的增殖。推断SCF、bFGF和mLIF的最佳作用剂量分别是：10-20ng/ml、10-20ng/ml和10-15ng/m1.