硫化氢改善高糖环境下内皮祖细胞功能活性的机制研究

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lu_bo_123
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目的:探讨外源性硫化氢(H2S)对高糖环境下内皮祖细胞(EPCs)功能活性的影响及机制研究。方法:采用密度梯度离心法从25-35岁健康志愿者外周血分离出单个核细胞(PBMCs),然后用EGM-2培养基对EPCs进行培养和诱导分化,细胞培养7天后通过用细胞免疫荧光检测EPCs摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-Ac-LDL)和结合异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素-I(FITC-UEA-I)的特性,鉴定出EPCs;在体外,将EPCs分别随机置于正常葡萄糖培养液(5.5mmol/L)、高糖培养液(33mmol/L)、高糖(33mmol/L)+不同浓度NaHS(H2S前体)(25μM、50μM、100μM、200μM)培养液中培养24h,然后观察并且比较各组EPCs体外增殖、迁移、黏附能力变化;在体内实验,首先建立裸鼠颈动脉内膜拉脱损伤模型,然后观察高糖对EPCs修复裸鼠颈动脉内皮损伤能力的影响,以及NaHS的保护作用;最后使用蛋白质免疫印迹(Western Blot)检测NaHS抗高糖环境下内皮祖细胞Akt和eNOS蛋白的表达情况。结果:高糖培养液作用EPCs 24h后,EPCs的增殖、迁移、黏附能力均明显下降(P<0.05);而当不同浓度的NaHS和高糖同时作用于EPCs时,细胞的增殖、迁移、黏附能力均得到明显改善(P<0.05);当高糖作用EPCs进行细胞移植时,其再内皮化能力明显下降(P<0.05),而当硫化氢和高糖同时作用于EPCs进行细胞移植时,其再内皮化能力明显改善(P<0.05),且EPCs表面的Akt/eNOS信号通路明显上调(P<0.05)。结论:1.NaHS(H2S前体)在一定范围内能够明显改善高糖环境下内皮祖细胞(EPCs)的增殖、迁移、黏附能力,并且能改善内皮祖细胞的血管内皮修复能力。2.外源性硫化氢(H2S)改善内皮祖细胞(EPCs)的血管内皮修复能力的机制可能与内皮祖细胞表面的Akt/eNOS信号通路相关。
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