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目的:胸腔积液是晚期非小细胞肺癌(non-mall cell lung cancer,NSCLC)最易合并的临床表现之一。分子靶向治疗在晚期NSCLC治疗中的地位日益凸显,2013年专家共识指出:对于NSCLC患者,建议有条件的单位同时行表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)基因突变、间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)和原癌基因1(c-ros oncogene 1 receptor,ROS-1)融合基因检测。但是部分晚期肺癌患者由于体质状况、经济问题、患者及家属意愿等原因,不能获取组织病理,从而影响疾病诊断及组织分子分型,那么细胞病理标本,尤其是胸腔积液中的细胞标本能部分或全部代替组织标本,对疾病的诊断、恶性肿瘤的组织分型及进一步分子分型作出判断,并指导治疗。然而,传统的细胞学涂片技术普遍存在细胞堆积重叠、背景染色深而不易观察、样本无法长期保存等缺点,将胸腔积液离心沉淀物制作成细胞蜡块,行切片HE染色,免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC),基因检测等检查,可能会弥补常规涂片检查的不足。本文收集了胸腔积液制作细胞蜡块,并与常规胸腔积液细胞涂片比较,探讨细胞蜡块技术在胸腔积液诊断方面的作用,并为无法取得组织标本的肺癌患者,提供EGFR、ALK等基因检测可行的新途径。方法:收集河北医科大学第四医院(东院区)呼吸内科2015年6月—2016年2月合并有胸腔积液的患者共54例,记录患者的性别、年龄、及胸腔积液部位、颜色、透明度、性质。均行常规细胞涂片HE染色(常规组),同期制作细胞蜡块,并行切片HE染色(细胞蜡块组),比较常规组与细胞蜡块组切片中细胞数目、形态、染色背景等,并比较两种方法诊断结果的一致性。细胞蜡块的制备步骤:收集:留取新鲜胸腔积液约250ml,室温下静置30min;离心:弃上清液,留取底层液体约120ml,均匀置于12个试管中离心,2000r/min,离心10min,(若沉淀量较少,可进行再次离心或多次离心);固定:弃上清液,用吸管将沉淀物吸出,移入备好的洁净小玻璃瓶中,加入10%中性缓冲福尔马林固定液10倍于沉淀物的量,用吸管轻轻吹打沉淀物,以便充分固定,静置、固定12h;脱水:弃去上清液,将细胞沉渣倒入折成漏斗形状的擦镜纸中,用吸水纸吸去多余液体,将擦镜纸包好后放入70%的酒精中过夜,脱水12h,用镊子取出,放置于吸水纸上吸干后,分别放入80%,95%,100%酒精中浓度梯度脱水各1h;送检:将经过脱水后的包有细胞块的纸包放入装有新的10%中性缓冲福尔马林固定液的小玻璃瓶中送病理科。统计方法:全部数据均采用SPSS13.0版统计软件处理。结果:1研究对象的临床特征纳入本研究的54例患者中,男性患者31例,占57.4%,女性患者23例,占42.6%;年龄分布范围在31-82岁,平均年龄为63.0±11.3岁,年龄≥65岁的24例,占44.4%,年龄<65岁的30例,占55.6%;血性胸腔积液12例,占22.2%,非血性胸腔积液42例,占77.8%;混浊胸腔积液44例,占81.5%,透明胸腔积液10例,占18.5%;左侧胸腔积液26例,占48.1%,右侧胸腔积液28例,占51.9%;渗出性胸腔积液49例,占90.7%,漏出性胸腔积液1例,占1.9%,介于渗漏之间的4例,占7.4%。2细胞蜡块制作成功率共收集54例胸腔积液标本,其中44例成功制作成细胞蜡块,制作成功率为81.5%(44/54)。3常规组和细胞蜡块组镜下特点及判读结果3.1镜下特点常规组显示:涂片厚薄不均、染色背景浓厚、细胞重叠堆积、结构不清。细胞蜡块组显示:染色背景干净,染色对比清晰,细胞数目富集、厚薄均匀,且在多数病例中可观察到细胞的排列方式及组织学结构。3.2判读结果3.2.1细胞蜡块组未找到癌细胞的16例标本的诊断常规组找到可疑癌细胞1例,异型细胞的3例,这4例中细胞蜡块组2例提示未见肿瘤细胞,2例可见少许退变异型细胞。1例胸腔积液病因诊断不明。有3例常规组及细胞蜡块组均未找到癌细胞,组织病理诊断为小细胞癌。有3例常规组及细胞蜡块组均可见淋巴细胞、浆细胞等成分,未见肿瘤细胞,临床诊断为结核性胸膜炎。另外5例是常规组找到癌细胞,细胞蜡块组为阴性。3.2.2常规组与细胞蜡块组的恶性胸腔积液检出率比较成功制备成细胞蜡块的44例标本中,常规组有33例诊断为恶性胸腔积液,11例未找到癌细胞;细胞蜡块组有28例诊断为恶性胸腔积液,16例未找到癌细胞。细胞蜡块组与常规组比较,诊断恶性胸腔积液的阳性一致率为84.8%,阴性一致率为100%,诊断准确度为88.6%。两组检出恶性胸腔积液的结果比较,采用四格表资料的Fisher确切概率法,得出P>0.05,结果无统计学意义,可以认为常规组和细胞蜡块组对于恶性胸腔积液的检出率相同。本实验中有1例胸腔积液中找到肺来源的腺癌细胞的细胞蜡块标本行ALK(D5F3)免疫组化检查,结果为(+++)。结论:1收集的54例胸腔积液标本,44例成功制成细胞蜡块,成功率81.5%,此项技术操作简单,耗材少,便于普及推广,对胸腔积液病因的诊断有一定应用价值。2细胞蜡块组与常规组恶性胸腔积液诊断一致性好,表明细胞蜡块技术能代替常规胸腔积液涂片检查,可推荐为胸腔积液诊断的另一种方法。3细胞蜡块切片显微镜下观察显示细胞数多,且细胞分布均匀,染色背景清楚,细胞形态清晰可见,并保留部分组织学结构,利于诊断。4将胸腔积液离心沉淀物制作成细胞蜡块,起到聚集细胞的作用,相当于组织块,可长期保存,连续切片,便于行特殊染色及基因检测等。