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Ghrelin是由28个氨基酸组成的第一个生长激素促分泌素受体的内源性配体,最早是由Koji眦等在小鼠和人的胃内分泌细胞及下丘脑弓状核中发现的。因其具有促进垂体前叶生长激素的分泌的作用而命名为Ghrelin。Ghrelin是目前为止除了生长激素释放激素和生长抑素外,第二个调节GH分泌的内源性物质。Ghrelin主要合成于胃,肠垂体、下丘脑、胎盘、肾脏、胰腺等亦有少量合成。根据现有的资料分析,Ghrelin除调节GH分泌外,还有增加食欲,调节能量平衡,促进胃酸分泌等作用。 目前关于Ghrelin在动物方面的研究较少,为了进一步探讨Ghrelin在动物中的作用机制本研究进行了猪Ghrelin基因的克隆与表达并结合免疫组化技术对Ghrelin在体内各组织中的分布定位进行了初步的研究。 根据Genbank中检索猪preproghrelin mRNA序列,设计了猪Ghrelin原核表达及真核表达系统的引物。通过RT-PCR技术扩增猪的Ghrelin基因后,将其目的片段与克隆载体pMD 18-T Vectot连接,转化入E.coli经鉴定正确后,回收目的片段分别与原核表达载体pET28a(+)、真核表达载体pVhX-Ⅰ的载体大片段相连接,分别构建了猪Ghrelin的原核和真核表达系统,首次获得了重组菌分泌的猪Ghrelin原核表达多肽及真核表达重组质粒pVAX-Ghrelin cDNA。以纯化的真核重组质粒佐以司班、甘油免疫小鼠,获取了鼠抗猪Ghrelin免疫血清,经ELIsA和Western-blot方法检测,获得了猪Ghrelin的多克隆抗体。利用本研究制备的鼠抗猪Ghrelin抗体,在国内首次利用免疫组化技术研究了Ghrelin的分布,结果表明:在猪的胃底腺部、小肠各段和胰岛均有Ghrelin的分布,下丘脑中也有少量分布。这些研究将为Ghrelin各方面进一步的研究奠定了基础。