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目的：头颈部恶性肿瘤是全世界常见的恶性肿瘤,其中以头颈部鳞状细胞癌为主,占了头颈部恶性肿瘤的90%。虽然近年来以手术为主,辅以放化疗的治疗手段不断提高,但头颈部鳞癌的五年生存率仍无明显提高,患者的生存质量也无明显改善。为了寻求头颈部鳞癌新的发病机制和治疗的研究方向,本文将研究C2-神经酰胺在头颈部鳞癌中对肿瘤细胞的保护和毒性作用及相关机制,以及与YAP蛋白表达的作用关系,以找寻头颈部鳞癌疾病发生、发展过程中重要的蛋白分子,为头颈部鳞癌的治疗研究提供理论基础和新的发展方向,并有望发现新的治疗靶点和治疗方法。方法：1.采用C2-神经酰胺与泛caspase抑制剂Z-VAD-FMK单独或联合处理头颈部鳞癌细胞系,应用光镜和流式细胞术,观察其诱导的头颈部鳞癌细胞凋亡作用；应用CCK-8实验技术观察其对头颈部鳞癌细胞的增殖和活性的影响；通过蛋白免疫印迹法检测cleaved caspase-3的蛋白表达变化水平,从而探讨C2-神经酰胺对头颈部鳞癌细胞的凋亡作用和相关的作用机制。2.采用C2-神经酰胺与坏死抑制剂Nec-1单独或联合处理头颈部鳞癌细胞系,应用DNA琼脂糖电泳技术和免疫荧光技术,观察其诱导的头颈部鳞癌细胞程序性坏死的作用；应用CCK-8实验技术观察其对头颈部鳞癌细胞的增殖和活性的影响,从而验证C2-神经酰胺诱导头颈部鳞癌细胞发生的程序性坏死作用。3.采用C2-神经酰胺处理头颈部鳞癌细胞系,应用电镜、免疫荧光技术和蛋白免疫印迹法,观察检测自噬效应蛋白LC3-Ⅱ的表达和自噬泡的形成；联合采用自噬抑制剂氯喹(CQ)处理细胞,应用CCK-8实验技术观察联合用药前后对细胞增殖和活性的影响；联合采用MEK抑制剂PD98059处理细胞,应用蛋白免疫印迹法检测自噬相关通路蛋白LC3B-Ⅱ、Beclin-1、p-ERK、p-AMPK、p-Akt、p-mTOR的表达水平,并应用CCK-8实验技术观察抑制剂作用前后对细胞增殖和活性的影响,从而探讨C2-神经酰胺诱导的头颈部鳞癌细胞发生自噬对细胞的保护作用以及可能的机制和相关信号通路。4.应用免疫组化技术检测60例头颈部鳞癌组织标本和癌旁正常组织标本中YAP蛋白的表达水平,通过统计学处理,分析蛋白表达与肿瘤的病理分级、患者性别之间的相关性；同时采用C2-神经酰胺处理头颈部鳞癌细胞系,应用蛋白免疫印迹法检测YAP蛋白的表达变化水平,探讨YAP蛋白与头颈部鳞癌发病的相关性以及与C2-神经酰胺的作用关系。结论：1.C2-神经酰胺处理头颈部鳞癌细胞后,细胞活性和增殖能力受到显著抑制,凋亡细胞明显增加,但细胞内cleaved caspase-3的蛋白表达水平无明显变化,且Z-VAD-FMK对C2-神经酰胺的促凋亡作用无显著影响,提示了C2-神经酰胺能有效诱导头颈部鳞癌细胞发生非caspase-3依赖的细胞凋亡作用。2.C2-神经酰胺处理头颈部鳞癌细胞后,细胞内坏死细胞数明显增加,而程序性坏死抑制剂能有效抑制C2-神经酰胺处理后坏死细胞的产生并显著抑制其诱导的细胞毒性作用,证实了C2-神经酰胺能有效诱导头颈部鳞癌细胞发生程序性坏死作用,并协同其诱导的凋亡作用,实现了抗癌的效果,而程序性坏死抑制剂能有效减弱这一效果。3.C2-神经酰胺处理头颈部鳞癌细胞后,细胞内自噬泡数量和LC3-Ⅱ、p-ERK表达水平显著升高,而自噬抑制剂和MEK抑制剂能有效抑制其诱导的自噬作用并进一步提升其对细胞活性和增殖的抑制作用,提示了C2-神经酰胺能通过ERKl/2信号通路诱导细胞发生保护性自噬作用,且自噬抑制剂能有效抑制这一自噬作用并增加C2-神经酰胺的细胞毒性作用。4.头颈部鳞癌组织和细胞系中YAP蛋白表达明显升高,但与肿瘤的病理分级无显著的相关性,而C2-神经酰胺处理后,能有效抑制癌蛋白YAP的表达水平,提示了YAP蛋白在头颈部鳞癌中的高表达与癌症的发生发展有关,可考虑作为肿瘤治疗潜在的靶点,而C2-神经酰胺可能通过调控YAP的表达从而发挥抑癌作用。