小鼠精子发生过程中dysbindin-1的表达

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目的:Dysbindin-1是溶酶体相关细胞器生物发生复合体-1(Biogenesis of Lysosome-related Organelles Complex-1,BLOC-1)的一个亚基,在多种溶酶体相关细胞器(lysosome-related organelles,LROs)的发生中发挥重要功能。LROs是一类有着和溶酶体相似特性的细胞器,如黑色素细胞的黑素颗粒、血小板的致密颗粒等,均来源于高尔基复合体,p H值呈酸性。此外,LROs还有一些细胞特异性组分,而且形态功能也因细胞不同而异。BLOC-1是由八个亚基组成的复合体,参与细胞内的囊泡形成和运输过程。精子头部的顶体被认为是一种LRO,在受精时发挥重要作用。迄今关于dysbindin-1在睾丸中的报道极少,其作用不明确。最近研究表明RNF151与dysbindin-1有直接相互作用。RNF151蛋白特异地表达在长形精子细胞中,鉴于dysbindin-1在囊泡运输中起重要作用,故推测该蛋白在顶体形成中发挥作用,但dysbindin-1是否参与顶体的形成并无实验证据。本研究探讨精子发生过程中dysbindin-1的表达及dysbindin-1对精子及顶体形态的影响,为进一步研究dysbindin-1在精子发生中的作用提供必要的形态基础。方法:取生后6-21 d、28 d、35 d、42 d和3月龄的雄性小鼠各3只,HE染色观察不同天数睾丸组织的形态结构,用western blot检测睾丸组织dysbindin-1的表达;以dysbindin-1缺失突变的sdy小鼠为研究对象,收集附睾尾部精子,一部分用western blot检测精子中是否有dysbindin-1的表达,另一部分制备精子涂片,HE染色显示精子形态,用异硫氰酸荧光素-豌豆凝集素(FITC-PSA)和抗精子蛋白56(sp56)单克隆抗体进行荧光染色显示顶体的结构。结果:1.不同品系成年小鼠的睾丸、附睾组织中只有dysbindin-1A,无-1C的表达。2.Dysbindin-1A在生后不同发育阶段小鼠睾丸组织中均有表达。在生后7 d时的睾丸组织已有dysbindin-1A的表达,在14 d、21 d和28 d有增多的趋势,到35 d和42 d时,又略有下降,但变化无明显的统计学意义(P>0.05)。dysbindin-1A主要表达在睾丸组织细胞的胞浆中。3.Dysbindin-1缺失突变的sdy小鼠的精子及顶体的形态与野生型相比未见明显异常。结论:Dysbindin-1A表达于小鼠精子发生的不同时期,dysbindin-1A对精子形态维持不起关键作用。
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