论文部分内容阅读
目的:应用miRNA基因芯片筛选宫颈鳞癌盆腔淋巴结转移阴性组和阳性组miRNA表达差异,寻找诊断和治疗宫颈鳞癌转移的新型生物学标志物和生物靶点,为进一步研究宫颈鳞癌淋巴结转移相关miRNA的调控机制提供实验依据。方法:1.收集在我院行广泛子宫切除+盆腔淋巴结清扫术的宫颈鳞癌患者盆腔淋巴结阴性组6例及阳性组4例。2.提取各标本总RNA,利用miRNA基因芯片筛选盆腔淋巴结阳性组/阴性组上调或下调2倍以上差异miRNA。3.从筛选出的miRNA中挑选出差异明显的miRNA,利用实时荧光定量PCR技术验证miRNA基因芯片结果。4.利用生物信息学网对表达差异的miRNA基因进行靶基因预测。结果:(1)我们通过miRNA基因芯片筛选出宫颈癌淋巴结转移阳性组和阴性组有176条miRNAs差异表达,根据以往研究及生物信息学网预测其中有48条差异miRNAs对应的靶基因中有与调控肿瘤相关基因,其中26条差异miRNAs上调,22条差异miRNAs下调,其中16条为差异的miRNAs对应的靶基因中有与调控肿瘤转移相关基因。(2)实时定量RT-PCR检测到miR-490-5p、miR-323-3p、miR-328,上调的倍数分别为:56.89536.8.180334.31.94124,而miR-31 miR-126、miR-144,下调的倍数为:16.3559、9.71628.32.4675, RT-PCR上调和下调的趋势是一致的,证明芯片结果是可靠的。(3)经RT-PCR验证的6条miRNAs中miR-490-5p、miR-328、miR-31、miR-144、miR-126的靶基因中有与调控肿瘤转移有关的基因。同一靶基因同时受到多个miRNAs调控,同一个miRNAs可以同时调控多个靶基因。结论:1.本实验用miRNA基因芯片检测到在宫颈癌淋巴结转移阳性组和阴性组有176条表达差异miRNAs,并寻找到48条miRNAs靶基因中有与调控肿瘤相关基因,其中16条miRNAs靶基因中有与调控肿瘤转移相关基因,初步明确了宫颈鳞癌转移相关miRNAs的表达谱。2.宫颈鳞癌相关miRNAs可能通过多个靶基因及多个途径调控淋巴转移。