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目的本实验购入人胚肺成纤维细胞（MRC-5细胞），通过RNA干扰技术将CXCL11-SiRNA和CXCR3-SiRNA干扰质粒分别转染入人胚肺成纤维细胞内，对矽肺纤维化相关基因CXCL11及CXCR3进行基因沉默，并用矽肺患者肺泡巨噬细胞培养上清刺激人胚肺成纤维细胞，观察细胞I、III型胶原表达情况，探讨CXCL11及CXCR3在矽肺纤维化中的作用。方法1获取矽肺患者肺泡灌洗液，离心收集肺泡巨噬细胞（AM），观察AM形态，并做常规HE染色、抗酸染色及瑞氏染色鉴定。用含SiO2的空白培养基刺激AM18h，收集上清并过滤保存备用。2构建ShRNA表达质粒：在Pubmed网站查询获得人类基因CXCL11及CXCR3的序列号，由上海吉玛公司构建两种基因的干扰质粒及相应的阴性质粒，质粒选取pGPU6/GFP/Neo-shGAPDH为载体。3CXCL11-SiRNA和CXCR3-SiRNA由LipofectamineTM2000脂质体介导分别转染入人胚肺成纤维细胞内，用激光扫描共聚焦显微镜观察质粒转染情况；转染36～48h后提取各组细胞总mRNA和总蛋白分别用realtime-PCR和Western-blot法筛选两个基因的最佳干扰序列。4实验分为4组：空白对照组（C组），常规10％胎牛血清MEM培养基培养；刺激组（S组），常规10％胎牛血清MEM培养基中加入之前保存备用的肺泡巨噬细胞培养上清；转染组（T组），将筛选的最佳干扰质粒转染人胚肺成纤维细胞后，常规10％胎牛血清MEM培养基中再加入保存备用的肺泡巨噬细胞培养上清；阴性质粒转染组（N组），将阴性干扰质粒转染细胞后，常规10％胎牛血清MEM培养基中再加入保存备用肺泡巨噬细胞培养上清。5免疫细胞化学法和Western-blot法检测I、III型胶原的表达：分别在SiO2刺激后的12h、24h、36h、48h和72h检测各组人胚肺成纤维细胞I、III型胶原蛋白的表达情况。结果1质粒转染人胚肺成纤维细胞36～48h后，激光扫描共聚焦显微镜观察到绿色荧光蛋白在人胚肺成纤维细胞中均有表达，其中当质粒:LipofectamineTM2000脂质体＝3μg:3μl时，转染率最高，可高达90％以上。2提取各组总mRNA和总蛋白，分别用realtime-PCR和Western-blot法筛选CXCL11和CXCR3干扰效果最好的序列：其中CXCL11的最佳干扰质粒为pGPU6/GFP/Neo-CXCL11-homo-352；CXCR3的最佳干扰质粒为pGPU6/GFP/Neo-CXCR3-homo-203；未转染组和阴性质粒转染组相比，统计学分析差异无显著性（P＜0.05）。3免疫细胞化学法和Western-blot法检测结果均显示：空白对照组细胞均有少量I、III型胶原蛋白的表达；刺激组与同时间点空白对照组相比，I、III型胶原蛋白表达上调（P＜0.05）；转染组与同时间点空白对照组相比，I、III型胶原蛋白表达上调（P＜0.05），但与同时间点刺激组相比，I、III型胶原蛋白表达下调（P＜0.05）；阴性质粒转染组与刺激组I、III型胶原蛋白量统计学无显著差异（P＞0.05）。结论1利用RNA干扰技术，分别将CXCL11-SiRNA和CXCR3-SiRNA转染入人胚肺成纤维细胞内，可有效抑制CXCL11和CXCR3基因的表达。2矽肺纤维化相关基因CXCL11和CXCR3沉默后，经AM上清刺激的人胚肺成纤维细胞I、III型胶原蛋白表达量减少。