立枯丝核菌拮抗菌的筛选及鉴定

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本研究以立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)为靶标病原菌,通过对不同环境样品中微生物的分离和拮抗菌筛选,得到了3株具有生防潜力的微生物菌株,进而对这些拮抗菌株的最佳发酵条件、发酵滤液中抑菌物质的理化性质以及在温室盆栽和离体试验条件下这些拮抗菌株发酵滤液对水稻纹枯病、豆角苗期立枯病的防治效果进行了研究,最后对这3株拮抗菌株进行了种类鉴定。具体研究结果如下: 1、通过对华南农业大学周边的植物根际土壤、水稻植株、丝核菌菌核等10种样品进行微生物的分离,共分离到细菌菌株325株、真菌菌株83株、放线菌菌株86株。通过琼脂平板活菌对峙法筛选及发酵滤液介质法筛选,获得了2株对立枯丝核菌具有强烈拮抗作用的菌株,分别为细菌菌株NB12和放线菌菌株NA1,这两个菌株均分离自果园根际土壤。通过盆栽接种防治试验得到了1株对豆角苗期立枯病有较高防效的真菌菌株HFX1,此菌株分离自菌核。 2、通过对细菌菌株NB12和放线菌菌株NA1发酵条件的优化,得到了这两个菌株产生抑菌物质的最佳发酵条件。细菌菌株NB12的最佳发酵条件为:30℃、180rpm、40mL/250mL装液量、初始pH为7.0、LB或者BPY培养基、培养时间为48h;放线菌菌株NA1的最佳发酵条件为:35℃、140rpm、130mL/250mL通气量、初始pH6.0~9.0、A3或者A6培养基、培养时间为≥48h。 3、通过对细菌菌株NB12和放线菌菌株NA1发酵产生的抑菌物质研究表明,NB12的硫酸铵沉淀物对立枯丝核菌菌丝有抑制作用,说明其成分部分可能为多肽类物质;NA1发酵滤液的抑菌物质可以通过正丁醇提取,用等量的丙酮可以将NA1滤液中无抑菌作用的杂质沉淀出来。 4、通过对拮抗菌株发酵滤液的稳定性试验,得出细菌菌株NB12和放线菌菌株NA1的抑菌物质均可以耐受100℃高温,细菌菌株NB12的抑菌物质可以在高温高压(121℃、1.05 kg/c㎡)条件下保持活性不变;放线菌菌株NA1的抑菌物质在高温高压(121℃、1.05 kg/ c㎡)条件下对立枯丝核菌的抑菌率下降了26%。放线菌菌株NA1的发酵滤液4℃条件下可以长时间保存,细菌菌株NB12的发酵滤液4℃最长可以存放30d。放线菌菌株NA1在连续培养6代后发酵滤液的抑菌效果稳定,细菌菌株NB12发酵滤液在第一代活性较低,在之后的7代中发酵滤液的抑菌效果均保持在较高水平。 5、通过盆栽及离体防效试验,得出细菌菌株NB12对水稻纹枯病均表现出较好的防治效果,特别是对离体水稻叶片纹枯病的防效达到86.2%,对水稻盆栽防效达到57.51%,对豆角苗期立枯病的防效达到65.38%。放线菌菌株NA1对水稻纹枯病也有一定的防效,但是其效果不如细菌菌株NB12显著。真菌菌株HFX1采用三种不同的混土方法防治豆角苗期立枯病最高防效达到78.57%。细菌菌株NB12对抑制立枯丝核菌菌核萌发方面的效果显著,菌核萌发抑制率达到84.52%。 6、通过传统鉴定方法与分子生物学手段相结合的方法,对这3个拮抗菌株进行了鉴定,确定细菌菌株NB12属于芽孢杆菌属(Bacillus),放线菌菌株NA1为一种链霉菌(Streptomyces triostinicus),真菌菌株HFX1为棘孢木霉(Trichoderma asperellim)。
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