论文部分内容阅读
癫痫是一种慢性脑部疾病，长期反复的痫性发作严重威胁患者的生理和心理健康。δ-阿片受体是一种在中枢神经系统中广泛表达的G蛋白偶联受体，δ-阿片受体活化后具有重要的神经保护作用，并与癫痫活动密切相关。本文主要对δ-阿片受体与癫痫发生发展之间的关系进行了分析，并初步探究了δ-阿片受体可能的作用机制。 本实验建立了戊四氮诱导的小鼠癫痫模型，并用δ-阿片受体激动剂DADLE和拮抗剂纳曲酮干预δ-阿片受体，以卡马西平作为阳性药物。给药结束后，参照Racine分级标准对小鼠行为进行评价分析，发现DADLE可以延长戊四氮诱导的癫痫发作的潜伏期并降低癫痫发作的严重程度，而纳曲酮会加重癫痫发作。对小鼠脑组织切片进行苏木精伊红染色和尼氏染色，结果表明DADLE可以减轻戊四氮造成的神经元损伤，而纳曲酮会加重神经元损伤，说明激活δ-阿片受体可能在癫痫中发挥保护作用。DADLE干预δ-阿片受体还能抑制癫痫发作中白细胞介素-1β表达的上调。对δ-阿片受体的表达水平进行检测分析，发现戊四氮可以引起皮层δ-阿片受体的上调，而对海马δ-阿片受体的表达基本没有影响。DADLE可以进一步刺激皮层δ-阿片受体的表达，同时，使皮层ERK磷酸化水平显著下降。 为了探究δ-阿片受体在戊四氮诱导的癫痫模型中的作用机制，我们用大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞模拟神经元，研究了δ-阿片受体在戊四氮损伤细胞模型中的作用与BDNF-ERK通路的关系。DADLE干预后，用不同浓度的戊四氮处理，通过对细胞活力和胞外乳酸脱氢酶含量的检测，发现 DADLE能减轻戊四氮对细胞的损伤。此外，DADLE干预δ-阿片受体会导致受体表达量的增加。对BDNF的含量进行检测，发现DADLE使BDNF的含量显著上调，而纳曲酮使BDNF的蛋白含量下降。同时，用k252a抑制BDNF/TrkB信号通路，DADLE对超氧化物歧化酶活性及谷胱甘肽含量的影响被阻断，说明 BDNF通路可能与δ-阿片受体活化后的调节作用有关。戊四氮作用于细胞，在短时间内提高了ERK的磷酸化水平，然而，δ-阿片受体干预对ERK磷酸化水平的影响并不显著。 以上结果表明，激活δ-阿片受体能够抑制癫痫发作，并在癫痫发作中发挥神经保护作用。δ-阿片受体在癫痫中的保护作用可能与其自身蛋白表达量的上调有关。此外，BDNF/TrkB信号通路可能参与了δ-阿片受体活化后在癫痫中的保护作用，ERK信号通路是否与该过程有关有待进一步研究。