【摘 要】
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目的:观察RNA干扰技术抑制肝癌细胞株survivin基因表达后对HepG2细胞增殖的影响,探讨RNA干扰survivin基因表达治疗肝癌的可行性。方法:构建针对人肝癌HepG2细胞survivin基因3
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目的:观察RNA干扰技术抑制肝癌细胞株survivin基因表达后对HepG2细胞增殖的影响,探讨RNA干扰survivin基因表达治疗肝癌的可行性。方法:构建针对人肝癌HepG2细胞survivin基因3个不同靶序列的shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-323/387/52,用Lipofectamine2000脂质体介导转染法转染质粒,分别进行以下的研究:(1)采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测survivin基因mRNA水平,分析RNA干扰的特异性;(2)选择对survivin基因表达抑制作用最强的shRNA载体转染HepG2细胞后,RT-PCR法检测转染后24、48、72 hHepG2细胞survivin的mRNA表达情况,分析RNA干扰的时效性;(3).四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测各组细胞的增殖情况。结果:(1)RT-PCR结果显示:构建的3个shRNA表达载体和对照组相比,pshRNA-survivin-387与对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05),而pshRNA-survivin-323/52表达载体对survivin的表达及mRNA水平的影响,与对照组比较差异无显著性意义(P＞0.05)。(2) RT-PCR结果显示:pshRNA-survivin-387表达载体干扰作用于转染后24 h即可出现,48 h达高峰,72 h有所回升;(3) MTT法表明:与对照组比较,实验组(pshRNA-survivin-387转染组)HepG2细胞的OD值在不同时间点均显著降低。结论:构建的针对人survivin基因387位靶序列的shRNA表达载体pshRNA-survivin-387在mRNA水平可显著抑制肝癌细胞survivin基因表达,并显著抑制HepG2细胞的增殖。
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