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目的:脓毒症是由感染引发的全身炎症反应综合症(systemic inflammatory response syndrome, SIRS),极易发展成为脓毒性休克和多脏器功能障碍综合症(multiple organ dysfunction syndrome, MODS),是临床危重病患者的主要死亡原因之一,尤其合并急性肾衰竭(acute renal failure, ARF)时其病死率更高。但目前临床上尚缺乏针对细菌脓毒症的有效防治措施,脓毒症的治疗一直是困扰医务工作者的一个难题。而血必净注射液具有活血化淤、改善血管通透性,减轻炎症反应的作用。本研究拟通过盲肠结扎穿孔术(cecal ligation puncture, CLP)方法建立与临床脓毒症(sepsis)相关较强的大鼠CLP模型,观察肾病理学变化、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)在肾组织的表达,监测血清肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的变化,进一步探讨脓毒症肾损伤的病理生理机制及血必净的治疗保护作用,为临床防治脓毒症提供新的思路。方法:本实验采用CLP法制作脓毒症大鼠模型。选用健康成年Spragne-Dawley(SD)大鼠144只,体重200～230g,随机分为4组:正常对照组(A组)24只、假手术组(B组)24只、脓毒症模型组(C组)48只、血必净治疗组(D组)48只。每组动物按照时间点术后6h、24h、48h、72h再分为4个亚组,其中A、B组各6只,C、D组各12只。各组大鼠在术前用10%水合氯醛(3ml/kg)麻醉。其中血必净治疗组术后分别于0h、12h、24h、36h、48h、60h静脉注射血必净注射液,每次剂量为4ml/kg;脓毒症模型组依同法平行注射生理盐水。CLP术毕均给予皮下注射10ml生理盐水抗休克处理。于CLP术毕开始计时,在相应时间点6h、24h、48h、72h将动物麻醉后,经腹主动脉采血,应用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法测定血清TNF-α及IL-6的浓度,同时分别监测相同时间点的血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(creatine,Cr)水平。取左肾,4%多聚甲醛固定,制成石蜡切片,行苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色光镜下观察病理形态学变化,免疫组化检测VEGF的表达。结果:1各组一般情况观察:A组无死亡,饮食、大小便正常,反应灵敏,呼吸平稳,被毛顺滑有光泽,喜扎堆取暖。B组大鼠术后30min左右完全清醒,一般情况同A组,剖腹未见恶臭、肠管水肿坏死等表现。C组大鼠出现苏醒延迟,醒后精神萎靡,身体蜷缩基本不活动,少量进水,对外界反应迟钝,呼吸频率加快,被毛蓬松少光泽,大便稀软,不再扎堆取暖。24h出现死亡大鼠。剖腹可见恶臭味血性渗液,肠管水肿粘连,盲肠坏死变黑。D组与C组相比,临床表现明显减轻,死亡例数减少。2各组大鼠肾脏组织学改变:A组肾组织结构完整,未见水肿、空泡变性、坏死等。B组与A组无明显差异。C组与对照组相比各组织结构清晰度下降,肾组织大量炎性细胞浸润,肾血管广泛微血栓形成和肾小球毛细血管淤血。肾小管上皮细胞空泡样变,排列紊乱,小管管腔狭小,间质充血、水肿。甚至出现核固缩,细胞结构消失。D组较C组病理损伤轻且减轻趋势明显。3生化指标观察:本实验所有生化指标A组与B组差异均无统计学意义(P<0.05)。CLP术后,C组血清TNF-α水平在6h即明显升高(42.37±2.96pg/ml),且一直维持较高水平; IL-6水平6h亦明显升高(197.96±6.23pg/ml),24h达到高峰(520.00±29.15pg/ml);BUN水平从6h开始明显升高(14.90±0.71mmol/L),Cr较BUN升高时间较晚,24h显著升高(106.73±7.45μmol/L),与A组、B组差异有统计学意义(P<0.05)。D组TNF-α、IL-6、BUN、Cr水平显著低于相同时间点未治疗组(P<0.05)。4肾组织VEGF表达:VEGF主要着色部位为胞浆。A组、B组不表达或少量表达,C组于6h时开始免疫组织化学评分(Immunohistochemistry score,IHS)显著升高(1.50±0.55),48h达到高峰(9.33±2.34)且一直表达较高水平,与A组、B组比较差异有统计学意义(P<0.05),D组24h亦出现表达(2.33±0.52),与C组比较明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),48h、72h差异亦有意义(P<0.05)。结论:1通过盲肠结扎穿孔术制做脓毒症肾损伤动物模型是可靠的方法,值得在有关脓毒症的实验研究中推广。2脓毒症大鼠体内TNF-α、IL-6及VEGF均显著升高,说明它们可能参与了脓毒症肾损伤的发病过程,具体机制尚待进一步研究。3应用血必净治疗后各组指标明显改善,为血必净应用于脓毒症的治疗提供了实验理论依据。