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目的：克隆人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子核心序列片段，并构建hTERT启动子调控的绿色荧光蛋白(GFP)基因表达质粒，初步研究hTERT启动子在肺癌细胞A549和正常人胚肺成纤维细胞MRC-5中的转录活性，以便为肺癌靶向性基因治疗的研究奠定基础。
方法：
1．以人胚肾293细胞(HEK293)基因组DNA为模板，应用聚合酶链反应(PCR)方法，克隆具有转录活性的hTERT启动子核心片段(238bp)，片段两端含限制性内切酶SalⅠ、BglⅡ的酶切位点。
2．将克隆的hTERT启动子核心序列片段插入无启动子的含绿色荧光蛋白(GFP)基因的报告质粒载体peGFP-1的多克隆位点中，构建含hTETR启动子调控的绿色荧光蛋白表达质粒peGFP-1-hTERT，并对其进行序列测定。
3．用含有巨细胞病毒(CMV)启动子的EGFP质粒peGFP-N1作为阳性对照，peGFP-1作为阴性对照，脂质体转染法分别转染肺癌细胞A549和端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞株MRC-5，荧光显微镜下观察两种细胞绿色荧光蛋白(GFP)表达情况，初步确定hTERT启动子在上述肺癌细胞株和MRC-5细胞株中的转录活性。
结果：
1．PCR产物电泳鉴定，显示克隆的DNA片段长约230-250bp，DNA测序结果与GeneBank中hTERT启动子的碱基序列完全一致，长为238bp。
2．限制性内切酶SalⅠ、BglⅡ双酶切重组质粒peGFP-1-hTERT，分别得到4.2kb、238bp的片段，与peGFP-1和hTERT启动子核心片段(238bp)的大小相吻合；以peGFP-1-hTERT。为模板，PCR扩增出238bp大小DNA片段。
3．转染阳性对照peGFP-N1质粒的肺癌细胞A549和端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞MRC-5均有绿色荧光蛋白(GFP)表达；转染peGFP-1-hTERT的肺癌细胞A549有GFP表达，而转染peGFP-1-hTERT的MRC-5无GFP表达；转染阴性对照peGFP-1的肺癌细胞和MRC-5细胞均无GFP表达。
结论：
1．本课题成功克隆了长度为238bp的hTERT启动子核心片段，并成功构建含hTETR启动子调控的绿色荧光蛋白(GFP)基因表达质粒peGFP-1-hTERT；
2．hTERT启动子在端粒酶阳性的肺癌细胞A549中有特异性的转录活性，而在人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞中无转录活性：
3．hTETR启动子能调控GFP在肺癌细胞中靶向性表达；CMV启动子调控的EGFP在肺癌细胞和正常细胞中的表达不具有特异性；hTERT启动子核心序列有可能作为肺癌靶向性基因治疗的表达调控元件。