论文部分内容阅读
采用等温滴定量热法（ITC）研究了298．15K～318．15K温度范围内牛血清白蛋白（BSA）与1种阴离子表面活性剂十二烷基磺酸钠（SDS）和7种阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十六烷基羟乙基二甲基溴化铵（CHDAB）、十六烷基二羟乙基甲基溴化铵（CDHAB）、十四烷基羟乙基二甲基溴化铵（THDAB）、十四烷基二羟乙基甲基溴化铵（TDHAB）、十二烷基羟乙基二甲基溴化铵（DHDAB）和十二烷基二羟基甲基溴化铵（DDHAB）在Tris-HCl缓冲溶液（pH=7．0）中的相互作用，由实验数据拟合出结合常数、结合位点数以及热力学函数。结果表明：BSA对SDS、CTAB、CHDAB、CDHAB、THDAB及TDHAB有两类结合位点，即高结合位点和低结合位点；高结合位点是由表面活性剂的极性基团和蛋白质分子表面的氨基酸残基之间的静电作用引起，有较高的结合常数，此过程为放热过程;低结合位点是表面活性剂的疏水基团与蛋白质分子的疏水空腔的疏水作用造成的，有较低的结合常数，此过程为吸热过程；BSA与DHDAB、DDHAB只存在一个较高的结合位点。BSA与表面活性剂结合作用的Gibbs自由能变均为负值，熵变均为正值。结合常数随表面活性剂亲水头基个数的增加而减小，随温度升高而减小，相应结合过程的焓变增大，熵变增大。对于高结合位点，结合常数随疏水碳链长度的减小而减小；对于低结合位点，结合常数随疏水碳链长度的减小而增大，相应的当碳链减小至C12时，低结合位点不明显，结合位点数可能只与碳链长度有关，随亲水头基和温度变化不明显。采用等温滴定量热法研究脲酶催化尿素的水解反应(尿素浓度147mmol·L-1，脲酶浓度3．0×10-7mmol·L-1，pH=7．0磷酸缓冲溶液)动力学，测定了该反应在298．15～31 8．15 K温度范围内的反应速率常数kcat砒和米氏常数Km等动力学参数。结果表明：在实验条件下，脲酶催化尿素的水解反应符合Michaelis-Menten机理；温度对kcat的影响遵循阿累尼乌斯方程，表观活化能为16．6kJ·mol-1；等温滴定量热法可有效地用于酶催化反应动力学参数的测定，是具有应用前景的研究酶活性的方法。采用等温滴定量热法尝试研究人体细胞色素CYP3A4(3．6×10-7mmol·L-1)催化药物2-氨基苯并咪唑和1-甲基-2-氨基苯并咪唑(5 mmol·L-1)的催化反应（pH=7．4磷酸缓冲溶液，310．15K），结果表明：在实验条件下，CYP3A4催化药物反应放热量小，代谢作用不明显，与2-氨基苯并咪唑相比，1-甲基-2-氨基苯并咪唑与CYP3A4作用的放热量稍大，可能有一点的弱结合作用，即非特异性结合作用，有待进一步研究。