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灰飞虱 Laodelphax strFaellen(small brown planthopper,SBPH)是水稻重要害虫之一,不仅以刺吸方式取食水稻,并且传播水稻条纹病毒(Ricestripevirus,RSV)引起条纹叶枯病的暴发和流行,给水稻生产造成严重的经济损失。1992年日本研究人员从灰飞虱种群中首次分离出Himetobi P病毒(Himetobi P virus,HiPV),HiPV是一种感染稻飞虱的类似ssRNA的昆虫病毒,属于蟋蟀麻痹病毒属(Cripavirus)。前期研究发现,RSV核糖核蛋白(RNP)可以与HiPV VP1蛋白互作,表明VP1蛋白可能参与灰飞虱对RSV的传播。为此,本论文围绕HiPV VP1与RSV的关系展开研究。一、灰飞虱江苏种群HiPV基因组全序列的测定与分析测定灰飞虱江苏种群(Q群体)HiPV基因组全序列,并与已报道的日本、浙江和江苏灰飞虱种群HiPV基因组全序列以及日本褐飞虱种群HiPV基因组全序列进行同源性分析,这5个HiPV分离物表现出很高的同源性,Q群体分离物与其他4个种群分离物的核酸序列同源性分别是98.8%、99.5%、99.7%和98.4%。二、带毒(RSV)灰飞虱与体内感染HiPV之间相关性分析在获得灰飞虱江苏种群HiPV基因组全序列的基础上,设计特异引物,通过qRT-PCR检测单头灰飞虱体内RSV-RNP和HiPV-VP1的表达量关系。结果显示,不同灰飞虱体内具有不同的RSV和HiPV病毒量,并且两者呈正相关关系;HiPV-VP1表达量高的灰飞虱体内RSV-RNP积累量也高,HiPV-VP1表达量较低的灰飞虱体内RSV-RNP积累量相对低;且大部分RSV高积累量的灰飞虱群体中,体内均含高量的HiPV-VP1,暗示灰飞虱体内HiPV-VP1可能会影响RSV的复制表达。三、HiPV对灰飞虱体内RSV的积累以及获毒(RSV)能力的影响分析利用RNAi技术,以HiPV-VP1基因为靶序列合成dsVP1,通过饲喂法,研究灰飞虱体内RSV复制和获毒(RSV)能力的影响。结果发现,通过喂食有毒灰飞虱dsVP1后,HiPV-VP1表达受到抑制时,RSV-RNP的积累量同样受到抑制,证明HiPV-VP1可以促进RSV病毒在灰飞虱体内的积累;而饲喂无毒(RSV)灰飞虱dsVP1后,进行饲毒实验,潜伏期后检测获毒率发现,抑制HiPV-VP1后灰飞虱对RSV的获毒率无显著影响。四、灰飞虱体内HiPV-VP1互作蛋白的筛选及分析构建诱饵蛋白酵母双杂交载体pGBKT7-VP1后,使用酵母双杂交系统在灰飞虱cDNA文库中筛选VP1的互作蛋白,最后获得10个VP1互作因子,其中至少有3个基因的ORF是完整的。筛选得到的这些互作蛋白因子,为进一步研究HiPV-VP1与灰飞虱之间的相互作用提供新的研究思路,为分析HiPV-VP1促进RSV在灰飞虱体内积累的相关机制提供理论基础,具有重要意义。