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背景目的:结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一。随着经济发展和饮食生活习惯的改变,目前我国的结直肠癌发病率呈逐年上升趋势,结直肠癌已经成为了我国公共卫生健康的重大问题,目前对于进展期结直肠癌,手术、化疗、放疗以及靶向治疗等手段取得较好的预后结果,但能发掘防治结直肠癌的新靶点具有更重要的意义。Girdin是一种新型的肌动蛋白结合蛋白,在多种肿瘤组织中异常表达,其表达程度与临床病理特征、肿瘤增殖和侵袭有关。微小RNA(miRNA)是一组独特的小非编码RNA,其通过与靶nmRNA的3非翻译区(UTR)结合因而在调节基因表达中起重要作用。研究表明,miRNA可以影响肿瘤的增殖、凋亡和迁移。本研究主要探讨Girdin表达水平与结直肠癌细胞凋亡之间的关系,以及miR-29c-3p 对 Girdin 的调控。方法:首先,我们采用qPCR、Western blot、免疫组织化学技术观察人结直肠癌与相应的癌旁组织标本中Girdin的表达差异,并根据GEO数据库分析Girdin表达水平与结直肠癌患者预后的联系。其次,我们构建过表达与抑制Girdin表达慢病毒载体,转染结肠癌细胞系干扰Girdin表达。采用CCK-8、平板克隆形成实验观察Girdin表达水平对细胞增殖能力的影响,同时通过AnnexinV/7AAD流式细胞术、DCFDA荧光探针、JC-1荧光探针检测结肠癌细胞凋亡以及凋亡相关细胞活动,Western blot 检测结肠癌细胞中Girdin以及Bx、Bcl-2、caspase-3等凋亡相关蛋白表达水平。最后,我们通过TCGA数据分析结直肠癌与正常组织中miR-29c-3p的表达差异,采用qPCR检测人正常结肠上皮细胞与结直肠癌细胞中miR-29c-3p的表达水平。双荧光素酶报告验证miR-29c-3p是否能与Girdin的 3’-UTR 结合调控 Girdin。qPCR、Western blot 进一步检测 miR-29c-3p 对 Girdin mRNA和蛋白表达水平的调控。结果:1.qPCR、Western blot和免疫组化结果显示人结直肠癌组织中Girdin的mRNA与蛋白含量均显著高于癌旁组织。GEO数据集GSE24551则显示Girdin低表达的患者预期存活率明显高于高表达患者。2.CCK-8与平板克隆形成实验结果显示过表达Girdin能够显著增加结肠癌细胞体外增殖,抑制Girdin表达能够抑制结肠癌细胞增殖能力。AnnexinV/7AAD流式细胞术结果提示,抑制结肠癌细胞中Girdin表达后能够诱导细胞凋亡。DCFDA荧光探针、JC-1荧光探针结果提示抑制Girdin表达后提高了结肠癌细胞中ROS水平和线粒体膜电位,以上促细胞凋亡行为能够被广谱caspase酶抑制剂降低。Western blot 显示抑制 Girdin 后,细胞中 caspase-3、caspase-9 以及 Bax/Bcl-2的比例显著上调。3.TCGA数据库分析以及q-PCR检测发现结直肠癌组织中miR-29c-3p的表达显着低于正常组织。双荧光素酶报告则显示miR-29c-3p能够与Girdin 3’-UTR结合。q-PCR、Western blot则进一步证明miR-29c-3p能调控结直肠癌细胞中Girdin mRNA以及蛋白表达。结论:抑制Girdin能够抑制结肠癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。Girdin可能是防治结直肠癌的检测标志物与有效新靶点。hsa-miR-29c-3p通过调控Girdin表达发挥抗结直肠癌作用。