【摘 要】
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目的:建立C57BL小鼠工程室模型,使用FGF/FGFR抑制剂（LY2874455）,探究其对FGF-2诱导组织工程室内脂肪生成影响的机制研究,从而为临床上脂肪与FGF2联合应用提供实验室依据。方法:1.工程化带蒂脂肪瓣的构建:修剪出小鼠一侧腹股沟带血管蒂大小约6.79±0.90 mg的脂肪瓣,将其置入已制好的组织工程室内,固定工程室及缝合创口,42天后取材。2.组织工程室内渗出液FGF2浓度检测
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目的:建立C57BL小鼠工程室模型,使用FGF/FGFR抑制剂（LY2874455）,探究其对FGF-2诱导组织工程室内脂肪生成影响的机制研究,从而为临床上脂肪与FGF2联合应用提供实验室依据。方法:1.工程化带蒂脂肪瓣的构建:修剪出小鼠一侧腹股沟带血管蒂大小约6.79±0.90 mg的脂肪瓣,将其置入已制好的组织工程室内,固定工程室及缝合创口,42天后取材。2.组织工程室内渗出液FGF2浓度检测:将20只小鼠构建组织工程室模型,分别在1天、3天、7天、14天、28天、56天取工程室内渗出液标本（每个时间点随机检测3只）,应用ELISA试剂盒测FGF2浓度。3.FGF/FGFR抑制剂（LY2874455）对工程化脂肪瓣再生机制研究:将30只小鼠随机分成两组,实验组（50n M-LY2874455组）15只,对照组（DMSO组）15只。实验组:构建组织工程室模型,并使用1ml针筒,将50n M的FGF/FGFR抑制剂（LY2874455）注满组织工程室内。对照组:构建组织工程室模型,并使用1ml针筒,将50n M的DMSO注满组织工程室内,两组分别于第7天、14天、28天、56天取材（每个时间点随机检测3只）,对其标本称量,采用HE、免疫荧光、Western blot、免疫组化检测。结果:组织工程化的带蒂血管脂肪瓣的构建是成功的。1.组织工程室内渗出液中FGF2浓度呈钟型变化:FGF2浓度从第1天的11.47±7.07pg/ml逐渐升高,到第14天升至最高峰51.69±1.71 pg/ml,与第1天相比具有统计学意义,p<0.05。随后下降,在第56天下降至10.92±2.94 pg/ml,与第14天相比具有统计学意义,p<0.01。2.FGF/FGFR抑制剂（LY2874455）抑制工程室内脂肪再生:DMSO组与50n M-LY2874455组在术后7天脂肪质量分别10.71±0.43mg、8.19±1.11mg,无明显差异,在第14、28、56天两组之间脂肪质量均有统计学意义,p<0.05。随着时间推移,DMSO组的脂肪质量逐渐增大,从第7天10.71±0.43mg增长至第56天20.09±5.0mg,差异具有统计学意义,p<0.05。而在50n M-LY2874455组中脂肪质量无明显变化。3.FGF/FGFR抑制剂（LY2874455）抑制了脂肪干细胞上的FGFR受体表达、FGFR磷酸化及脂肪干细胞的增殖:荧光结果显示,FGF/FGFR抑制剂（LY2874455）显着降低了该组FGFR1（Tyr653/Tyr654）的磷酸化强度,DMSO组可见磷酸化FGFR1（Tyr653/Tyr654）在第14天强表达。在早期（14天内）,我们可以在DMSO组血管周围观察CD34+及Ki-67+的细胞表达,在第28、56天见少量表达,且在各时间点明显多于50n M-LY2874455组。50n M-LY2874455抑制剂加入后FGFR1的表达减少,并同时显著降低FGFR1（Tyr653/Tyr654）的磷酸化强度。4.FGF/FGFR抑制剂（LY2874455）抑制了工程化带蒂脂肪组织ERK表达:DMSO组第7、14天的表达明显升高,50n M-LY2874455组的整体ERK1/2的水平无明显变化,且在不同时间点均低于DMSO组,具有统计学意义（p<0.01）。5.FGF/FGFR抑制剂（LY2874455）抑制了工程化带蒂血管脂肪瓣的脂肪干细胞成脂分化:在早期（14天）C/EBPb的表达的阳性百分比呈升高趋势从第7天的3.80±0.08%升高至5.64±0.13%,并在第14天达到峰值,晚期（14天后）逐渐下降至1.10±0.12%。PPARγ组的表达阳性百分比则随之间推移逐渐增多,从第7天4.19±0.15%升至第56天7.74±1.75%,在第56天时,DMSO组PPARγ表达为7.74±1.75%较50n M-LY2874455组4.33±0.18%表达明显增多,且具有统计学意义,p<0.01。结论:1.脂肪工程室的构建是成功的,并是可重复的。2.FGF2在工程化带蒂脂肪瓣置入后早期（14天内）促进脂肪干细胞增殖,晚期（14天后）促进其向成脂肪方向分化。即脂肪工程室内脂肪再生早期（14天内）为高浓度FGF2作用于脂肪干细胞上的FGFR受体激活ERK信号通路参与诱导组织工程室内脂肪干细胞增殖。脂肪工程室内后期（14天后）随时间推移,FGF2浓度逐渐下降,脂肪的再生以为脂肪分化为主。3.FGF-2是诱导脂肪组织工程室中脂肪再生的必要因素。
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