【摘 要】
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目的： (1) 观察高血糖状态下大鼠骨髓中是否存在胰岛样细胞。 (2) 建立体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)的方法，确定其生物学特性。 (3) 体外诱导BM-MSCs转
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目的： (1) 观察高血糖状态下大鼠骨髓中是否存在胰岛样细胞。 (2) 建立体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)的方法，确定其生物学特性。 (3) 体外诱导BM-MSCs转分化为胰岛样细胞，评估其生物学功能。 (4) 探讨BM-MSCs在糖尿病大鼠体内转分化为胰岛素阳性细胞的潜能。 (5) 观察BM-MSCs对移植胰岛功能的保护作用。 方法： (1) 分别采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)或高糖诱导Sprague-Dawley(SD)大鼠糖尿病动物模型和一过性高血糖状态，同龄正常SD大鼠作对照。经密度梯度离心法分离、贴壁法培养原代骨髓细胞，倒置显微镜下观察细胞形态，免疫荧光激光共聚焦显微镜观察胰岛相关激素的表达，RT-PCR法检测胰岛相关激素、β细胞标志(GLUT-2、GK、GLP-1R)和转录因子(PDX-1、Ngn3、NeuroD1、PAX-6、NKX2.2)基因的表达。流式细胞术检测胰岛相关激素的阳性细胞数，以及胰岛素与CD45／CD90共表达率，ELISA检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌量(GSIS)。 (2) 采用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离、培养SD大鼠BM-MSCs，观察细胞形态和超微结构，绘制生长曲线，测定对数生长期的细胞倍增时间，纤维母细胞集落形成实验(CFU-F)检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期。采用免疫荧光法和流式细胞术检测细胞表面CD45／CD90、CD45／CD29表达及阳性率。并分别予成骨和成脂诱导分化，Von Kossa染
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